• Santé - Résultat, Migration, Enzymes, Poids

[Biologie Moléculaire] électrophorèse des enzymes.

Ton zymogramme te montre le resultat d'une migration selon selon le point isoelectrique des tes enzymes et non leur poids moleculaire. Pour reveler tes enzymes, tu as peut etre ajoute un compose qui provoque la reaction enzymatique choisie, du coup, tu peux quantifier grossierement l'activite de tes enzymes par la meme occasion.  [...] Lorsque tu as differentes taches sur la meme piste, cela veut dire que tes differentes enzymes ont un point isoelectrique different, et plus la tache est grosse, plus tu avais d'enzymes potentiellement actives au moment de ton extraction.  [...]

[Biochimie] Biosynthèse

La biosynthèse de l'insuline s'amorce dans le noyau des cellules B, à partir de l'information contenue dans le code génétique, située sur le chromosome 11, et son parcours intracellulaire se poursuit dans le réticulum endoplasmique rugueux après la transcription en ARN du gène codant pour une grosse molécule précurseur.   [...] Le segment pré coupé par des enzymes, synthétisés par d'autres ribosomes, est responsable de la migration de la chaîne protéique en cours d'assemblage vers l'intérieur des cavités du réticulum endoplasmique rugueux. La molécule de pré-pro-insuline est alors transformée en pro-insuline (86 acides aminés, poids moléculaire H 9000) contenant les chaînes d'acides aminés qui donneront l'insuline (51 acides aminés, poids moléculaire H 6000), plus un segment, le peptide de connexion ou peptide-c (31 acides aminés, poids moléculaire H 3000) reliant la fin de la chaîne A au début de la chaîne B.  [...]

[Immunologie] immunoblot...

Pour lire un poids moleculaire d'une proteine inconnue sur un gel, je dessine une courbe de calibration avec mes poids moleculaires standards. et apres Y a t-il un rapport logarythmique dans la migration des molecules.  [...] Je crois que l'objet de la question de Clac2000 est comment, à partir du standard, on détermine pus précisément le PM de la protéine. Si tu la connais, effectivement c'est juste une vérif et une lecture approximative sur le gel suffit. Si tu ne la connais pas, tu peux faire une courbe ou tu mets le Rf (distance parcourue/distance totale) en fonction du poids moléculaire connu de tes standards.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr 16s ADNr qui présente des hybridations non spécifiques!

J'ai plusieurs souches bactériennes non identifiées que je voudrais identifier grace à la PCR 16s de l'ADNr. Le résultat de la migration sur gel d'agarose à 1% révèle. le résultat suivant.  [...] Tu peux aussi réduire le temps de l'hybridation et de l'élongation, plus ceux ci sont longs plus les amorces pourront se fixer sur des sites sensiblement équivalents aux séquences d'intérêt. Un bond de 10°C... c'est quand même énorme, le mieux est de disposer d'un thermocycleur pouvant faire des gradients sur la plaque, mais bon, il faut qu'il soit quand même récent.   [...]

Migration SDS PAGE

Le problème viens de la migration (200Volt constant, ampérage se régule seul), qui est réalisée en tampon MES (50mM mES, 50mM Tris Base, 0.1% SDS et 1mM EDTA), la migration du gel se passe bien, la séparation du poids de marqueur moléculaire est jolie et bien distincte, mais après coloration au bleu de coomassie (1H sous agitation), et décoloration à l'eau tiède.  [...] Je suis ce protocole depuis toujours pour la migration des gels en tampon MOPS (protéine standard), et je n'ai aucun soucis. Le fait de passer en tampon MES (protéine de faible poids) me donne des gels illisibles.  [...]

[Biologie Moléculaire] Quelles sont les différentes étapes quand on travaille sur les microsattélites

L'étape trois découle de l'étape deux. Quelles sont les micro-satellites que tu as amplifiés Est ce qu'il s'agit de séquence de 20pb, répétées de 20 à 50 fois Ou de séquence de 5pb répétés 10-20 fois Suivant la longueur du satellite et son nombre de répétition min-max, tu en déduis les marqueurs du poids moléculaire (généralement un marqueur tout les 1-0.  [...] Après, pour les étapes 4-5, je ne sais pas, vu que je le faisais à la main (calcul de taile, du nombre de répétition et finalement du polymorphisme). J'aurais envie de le faire sur une feuille de calcul Excel, mais il y a probablement des logiciels spécialisés. Si quelqu'un en connais un.   [...]

[Biochimie] Question Western Blot et Coomassie

Nous avons réalisé un Western Blot (membrane PVDF) et en parallèle sur un autre gel une coloration au bleu de Coomassie, en déposant les mêmes solutions.   [...] 1/ le marqueur de poids est indicatif, d'ailleurs la composition de votre gel et tampon de charge modifie un peu les profils de migration.  [...]

[Biochimie] électrophorèse

J'ai réalisé une électrophorèse SDS-PAGE, et j'obtiens à l'aide de marqueurs, un courbe dont l'abscisse correspond au distance de migration et l'ordonnée, le Log du Poids Moléculaire.  [...] Le problème est que je n'arrive pas à obtenir un seuil de coupure correspondant a mes pourcentage de gel. ( comparaison avec les valeurs commerciales). Je sais qu'il faut tracer une tangente mais quelle valeur prendre.   [...]

Recepteur à l'insuline en SDS PAGE

Bon en fait le SDS c'est un détergent anionique fort qui va dénaturer tes protéines et les charger négativement (ce qui explique pourquoi elles migrent toutes dans le même sens ) mais le SDS ne clive pas les ponts dissulfures... A l'inverse, le bêta mercaptoéthanol clive les ponts dissulfures c'est pour ça que lors d'une dénaturation en général on balance du SDS, du bêta mercapto et on chauffe à 100°C pendant quelques minutes.   [...] Et donc, selon la distance de migration pour un type de gel donné sera associé à un rayon de Stock théorique...proportionnel à la taille de la protéine complexée par les molécules de SDS, et donc, proportionnel au poids moléculaire.  [...]

Diagnostic bactériologique : comment dépister une infection ?

La migration ( chromatographie ) de cet assemblage anticorps/virus est visualisée dans les minutes qui suivent (principe identique à celui des tests de grossesse ) et renseigne alors un résultat positif.  [...] Plus longues (18 à 24 heures, parfois 48 à 96 heures), les méthodes de microbiologie classiques consistent à mettre en culture, sur un milieu adapté, la bactérie à identifier. Une série de tests biochimiques, destinés à mettre en évidence la présence ou l'absence d'enzymes bactériennes, permet également d'obtenir un profil phénotypique (ensemble de caractères) qui est ensuite comparé à une base de données.  [...]