• Santé - Restriction, Vecteur, Clonage, Fragment

[Biologie Moléculaire] Clonage par PCR taille des amorces

En général les oligos font 20-30pb et on essaye d'avoir un ratio équilibré entre les G+C et les A+T (dans ces conditions, une PCR aux température d'hybdridation classiques 51-58°C doit fonctionner). La restriction coupe ton ADN proprement, pas besoin d'ajouter des bases pour protéger ta séquence codante.  [...] Ce que je fait en général, c'est de cloner la séquence amplifié avec la présence des sites de restriction dans un vecteur de clonage pour fragment PCR. Ceci permet d'avoir des morceau d'ADN de part et d'autre des sites de restriction. Je clone ensuite le fragment dans mon vecteur d'expression.  [...]

ADN de séquence inconnue, choix des enzymes de restriction.

Supposons que l'on veuille insérer un brin d'ADN de séquence inconnue dans un vecteur, comment fait-on pour choisir les enzymes de restriction idoines pour couper ce brin d'ADN au bon endroit (c'est à dire à ces deux extrémités, pour pouvoir cloner le brin d'ADN dans son intégralité).  [...] Si j'ai un fragment inconnu j'aurais tendance à ne pas essayer de couper mais à utiliser la Klenow ou la TNK4 pour rendre les extrémités du fragment franches. Du coup, j'ouvre le vecteur avec une enzyme de restriction qui génère des extrémités franches, et dont le site de restriction se trouve dans la cassette de clonage, et je ligue.  [...]

génie génétique

On peut choisir de fabriquer un fragment dont chaque extrémité présente un site de restriction différents ET qui sont aussi sur le plasmide, comme ça le fragment ne pourra s'insérer que dans un sens qui est celui sur le plasmide de clonage. ok.  [...] Pour la question initiale, on peut en discuter en privé si tu veux. en gros la stratégie est de faire en sorte que le fragment de restriction soit différent sur ces deux bords pour qu'il s'insère de façon complémentaire dans le vecteur (comme un Tetris.).  [...]

[Biologie Moléculaire] vecteur de clonage et le vecteur d'expression

svp quelle est la difference entre le vecteur de clonage et le vecteur d'expression à part que l'un a un promoteur et pas l'autre.  [...] Vecteur de clonage. Destiné à isoler physiquement un fragment d'ADN et à amplifier le nombre.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteurs navette

Vecteur de clonage. est un plasmide ayant une réplication autonome dans la cellule hôte et un site multiple de clonage afin de cloner un fragment d'ADN d'intérêt.  [...] Yep. Les vecteurs navette possèdent les deux types d'origine de réplication (procaryote et eucaryote) ce qui leurs permet de passer d'un type de cellule à l'autre.  [...]

Définition | Clonage | Futura Santé

Le clonage est la reproduction à l'identique d'un individu. Chez les végétaux, les boutures sont des clones. Il est possible d'obtenir un individu entier à partir de fragments de tissus prélevés sur une plante. Les tissus sont cultivés sur une gélose en présence d' hormones végétales et permettent d'obtenir une petite plante qui peut être repiquée.  [...] Le terme de clonage désigne aussi une méthode de multiplication in vitro d'un gène ou d'un fragment d' ADN. Le clonage cellulaire, souvent utilisé dans la recherche médicale, permet de multiplier une cellule en de nombreux exemplaires. Pour cloner un gène, les scientifiques utilisent des enzymes de restriction qui découpent l'ADN en des endroits précis.  [...]

[Génétique] carte de restriction

j'ai un exercice dans lequel je dois faire la carte de restriction. or je n'arrive pas à comprendre comment faire car j'ai. région du promoteur du gène et la séquence du site de clonage multiple.  [...] Tu prends la séquence de clonage et tu cherches tous les sites dans ta séquence promoteur+ gene. Ensuite tu en déduis la taille de chaque fragment généré par restriction.  [...]

[Biologie Moléculaire] pcr/clonage

La PCR va permettre d'isoler et amplifier un fragment d'intérêt qui va ensuite être intégré dans un vecteur. Lorsqu'on fait un clonage ou un sous-clonage, on souhaite exprimer ce fragment qui dans la plupart des cas correspond à l'ADNc codant une protéine ou une partie de la protéine.  [...] Il faut donc un promoteur en amont du fragment pour qu'il soit transcrit, il faut des séquences d'initiation de la transcription pour l'expression chez une bactérie, une séquence ori qui permet la réplication du vecteur et de son insert. Tout ceci se trouve dans un vecteur et est indispensable à l'utilisation du fragment isolé.  [...]

[biologie moléculaire] Opéron lactose

Dans un vecteur de clonage, on trouve un gène LacZ qui produit la béta galactosidase. En présence de X-gal, la béta-galactosidase produit un composé de couleur bleue. Pour que cette coloration soit active, il faut que le gène de LacZ soit intact. Or le site de clonage du fragment se trouve en général au milieu du gène LacZ.  [...] Donc dans l'ordre, tu clones ton gène recombinant dans ton vecteur, tu transformes une cellule de E. coli avec ton vecteur, tu la fait pousser sur un milieu contenant un antibiotique, du X-gal et de l'IPTG. Si la colonie devient bleue, c'est que le vecteur se trouve dans la cellule, mais que le gène LacZ est intact, donc l'insertion du gène recombinant n'a pas fonctionné.  [...]

taille d'insert maximum à liguer dans un vecteur

je ne connais pas le plasmide en question, mais d'une maniere generale, presque tout est possible, mais c'est juste un peu plus dur de cloner les grand inserts. si c'est du clonage classique (restriction/ligation) Il y aura un peu moins de reussite que pour un petit fragment, mais 7.  [...] En fait j'ai eu un cours sur le fait que certains vecteurs ne peuvent insérer que des fragments d'une taille leur permettant de faire une ligation correcte.  [...]