• Santé - Restriction, Promoteur, Séquence

[Génétique] carte de restriction

j'ai un exercice dans lequel je dois faire la carte de restriction. or je n'arrive pas à comprendre comment faire car j'ai. région du promoteur du gène et la séquence du site de clonage multiple.  [...] Tu prends la séquence de clonage et tu cherches tous les sites dans ta séquence promoteur+ gene. Ensuite tu en déduis la taille de chaque fragment généré par restriction.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problèmes: Recombinaison d'un plasmide

Lorsqu'on incorpore un gène dans un plasmide disponible dans le commerce, on aimerait insérer le moins d'ADN supplémentaire possible en plus du gène réel avec son promoteur. Parfois, cependant, il n'y a pas de séquence de restriction appropriée dans la région avant et après le gène qui peut également être trouvé dans le plasmide.  [...] Si il n'y a pas de site de restriction utilisable encadrant ton gène, il va falloir en ajouter. On va donc ajouter 2 sites de restrictions différents de chaque côté de ton gène. Note que pour l'énoncé 1 tu peux utiliser 2 fois la même séquence de restriction car comme tu as déjà ton promoteur le sens d'insertion du gène n'a pas d'importance.  [...]

Déchiffrage d'une carte de plasmide

La séquence de polyadénylation BGH est située juste derrière les sites de restriction ce qui permettra à ta séquence insérée de recevoir une queue polyA et tu obtiendra un ARNm fonctionnel (=traductible en protéine).  [...] Juste avant les sites de restriction tu as bien sûr un promoteur pour initier la transcription de ta séquence (Pcmv). Les séquences Ori sont les origines de réplication du plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Séquence du promoteur du gène résistance à l'ampicilline

J'aimerais savoir où trouver la séquence du promoteur de ce gène. C'est pour savoir si le site de restriction que j'ai choisi n'est pas trop près du promoteur.  [...] Je dois faire une restriction avec une enzyme et il ne faudrait pas que ça me coupe le promoteur. Je dois vérifier que l'enzyme est assez en amont du promoteur.  [...]

séquence kozak

je souhaite faire une transgénèse chez la drosophile, je dispose d'un vecteur possédant le promoteur qui m'intéresse. De plus, j'ai également l'ADNc d'interet avec les séquence 5' et 3' UTR mais je clone directement à l'ATG. Je vais créer un site de restriction avant cet ATG afin de pouvoir le cloner faut il aussi que j'ajoute une séquence Kozak pour avoir une bonne expression de ma prot ou n'est ce pas nécessaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Promoteur banque BAC

J'aimerai globalement connaitre la démarche pour récupérer une séquence promotrice d'une banque BAC pour ensuite le cloner dans un vecteur rapporteur et étudier ce promoteur.  [...] Tout dépend de la longueur de promoteur que tu veux mettre en amont du gène rapporteur. S'il n'est pas très long, tu peux réaliser une PCR avec des amorces encadrant la région promotrice que tu désires. En 5' des amorces tu ajoutes la (les) séquence(s) de restriction correspondant au(x) site(s) de restriction que tu as choisi sur ton vecteur pour l'intégration du promoteur.  [...]

[Génétique] promoteur de la transcription

La séquence TATAAT désigne une séquence type d'un promoteur telle qu'on la désigne en lisant le brin codant. Ce brin codant porte l'information d'initiation de transcription.  [...] De plus, les promoteurs dit à régulation positive ont des séquences promotrices particulières qui font que ces promoteurs sont faibles et ont besoin de molécules (protéine de régulation) se fixant sur l'ADN (sur des sites appelé opérateurs) pour être fonctionnels.  [...]

séquence promotrice / séquence régulatrice

Dans le sens où les polymérases ont une affinité différentes en fonction de la séquence du promoteur (qui est un élément obligatoire pour la transcription.) on peut dire que le promoteur fait partie de la région régulatrice.  [...] exemple chez les eubactéries. Plus la séquence du promoteur est proche de la séquence consensus (TTGACA -quinzaine de nucléotides- TATAAT) plus l'affinité de l'ARN polymérase pour le promoteur est forte et plus il y a de transcription du gène sous contrôle de ce promoteur.  [...]

Adn

Après pour ton autre question j'aurais tendance à dire oui. Car chez les eucaryotes un ARN représente un gène à l'inverse des procaryotes où ils ont des ARN polycistroniques représentant plusieurs gènes. L'ARN des eucaryotes est transcrit via l'ARN polymérase II qui utilise tout les éléments de la séquence promotrice pour correctement se positionner sur le promoteur.  [...] Ensuite on a la transcription de l'ARN puis l'ARN polymérase rencontre une séquence de terminaison qui est un signal permettant le décrochage de l'ARN polymérase II. L'ARN polymérase décrochée va de nouveau se positionner sur le promoteur et recommencer son cycle.  [...]

[Biologie Moléculaire] Facteur de Transcription ? (S.O.S)

Je te pardonne un intron est possiblement une séquence régulatrice, mais pas forcément. Non, ça peut pas être un promoteur, car un intron est dans la séquence codante d'un gène. La partie promotrice est en amont d'un gène. Une séquence agissant en cis. oui, possible, ça revient à dire que l'intron est une séquence régulatrice du gène.  [...] Ah oui sachant qu'un promoteur et un terminateur ne sont pas transcrit je comprends mieux pourquoi un intron ne peut pas être un promoteur et il ne peut pas être non plus un facteur trans agissant en cis c'est à dire sur un promoteur car il ne code pour aucune protéine de plus lors de l'épissage du transcrit primaire il est éliminer donc du coup je comprends pas pourquoi on dit que l'intron n'est pas une séquence poubelle puis ce que finalement il ne participe pas a grand chose dans le gène Il me semblait qu'a une certaine époque on le considérait comme étant de l'adn poubelle et que finalement après le projet ENCODE de 2003 ça a révéler qu'ils avaient une importance dans la régulation mais qu'elle type de régulation.  [...]