• Santé - Restriction, Fragment, ADN

[Biologie Moléculaire] Enzymes de restriction VS fragment d'ADN

Voilà. l'idéal, si tu peux te le permettre, c'est avoir des sites de restriction différents sur tes amorces sens et antisens, comme ça lorsque tu fais ta ligation, pas de fermeture du vecteur sans insert, et pas df'insert dans le mauvais sens. (Je pense que ton vecteur possède un polylinker.).  [...] J'ai effectivement coupé l'autre extrémité de mon insert avec une autre enzyme pour m'affranchir de toutes les étapes de phosphorylation / déphosphorylation. Et encore, ma ligase a des propriétés de polymérase et est capable de réparer l'ADN avant la ligation, si bien qu'elle peut quand même lier deux extremités cohésives différentes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide génie génétique

Le polylinker est une zone riche en sites uniques de restriction, ce qui y facilite l'introduction d'un fragment ADN par ligation.  [...] Le polylinker est une région contenant de nombreux sites de restriction qui vont permettre l'intégration de l'insert dans le plasmide.  [...]

[Biotechnologie] Construction plasmidique

Premièrement je digère un fragment d'ADN génomique avec les enzymes de restriction afin de récupérer le gène à intégrer.  [...] Tu récupère ton gène à intégrer dans ton plasmide en l'amplifiant par PCR, c'est ensuite que tu digére t'es amplifiants en utilisant les mêmes enzymes de restriction que tu utilise pour digérer ton plasmide.  [...]

Technique : RFLP

Après avoir extrait l'ADN de ces champignons, on va faire une RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) sur l'ADN extrait.  [...] L'objectif de la RFLP (Restriction FRagment Lenght Polymorphism pour Polymorphisme de longueur des fragments de restriction) est de mettre en évidence des variances alléliques.  [...]

Composition d'une cellule souche

Elle est aussi utilisée quand l'ADN à integrer est deja méthylé et qu'il risque d'être dégradé par la bactérie (fragments de virus). Enfin c'est ce que j'ai vu dans les abstracts de plusieurs publis en essayant de chercher la signification exacte de MCR.  [...] C'est un systeme de protection contre l'ADN exogene (comme les phages par expl). Cet ADN ne possede pas le meme pattern de methylation que celui de la bacterie donc le systeme de restriction de la bacterie doit pouvoir fragment l'ADN avant que celui ci ne s'exprime.  [...]

[Biochimie] (licence/master) Question sur la pcr pour un rapport de stage, merci

C'est une PCR qui permet d'étudier la variabilité d'un gène. On utilise des amorces ciblant un gène homologue sur les différentes espèces puis on utilise une enzyme de restriction puis on compare le profil sur gel. C'est une méthode plus longue que les autres PCR.  [...] Pour la RFLT (une variante de RFLP restriction fragment length polymorphism) c'est un peu confus. Cette technique permet surtout de voir des différences de tailles dans l'ADN (et plus spécialement les VNTR).  [...]

[Biologie Moléculaire] the Genome walking method

Etant sur un forum francophone, évitez de mélanger anglais et français dans vos messages. Faites au moins un effort de traduction si les informations que vous trouvez sont en anglais.   [...] La première étapes consiste a construire une banque de fragment tagé (restriction et ligation du tag). Et après y a une PCR et une nested a faire, avec une amorce spécifique de ta séquence connu et une amorce spécifique du tag.  [...]

[Biologie Moléculaire] enzyme de restriction

est il possible d insérer un fragment d adn dans un plasmide linéarisé par une enzyme de restriction non palindromique.  [...] Oui c'est possible, à condition d'insérer un fragment d'ADN à extrémités cohésives.  [...]

[Biologie Moléculaire] Erreur de taille sur SDS-PAGE

Deuxièmement je voudrais savoir si il fallait un distance minimum de part et d'autre d'un site de restriction pour que l'enzyme clive le double brin d'ADN. Là aussi je précise mon idée. J'ai un site de restriction qui se trouve 71pb avant la fin du fragment d'ADN et je voudrais savoir si c'est possible que l'enzyme ne le vois pas.  [...] Pour le SDS je ne sais pas.Mais pour la restriction, il ne devrait pas y avoir de problème.On peut bien creer des fragment PCR avec juste un site de clivage de chaque coté et les cliver ensuite.Je sais pas si mon exemple et très clair, mais toujours est-il que je suis quasi sur que ça ne posera pas de problème.  [...]

[Biologie Moléculaire] RFLP: génie génétique et diagnostiques

1)comment est ce possible J'ai cru comprendre que l'heterozygote a 3 fragments.les deux fragments(correspondant aux personnes saines) et un autre plus longs(site de restriction modifie,celui du muté).  [...] C'est pas un fragment d'adn en plus c'est qu'entre 2 allèle la séquence n'est pas la meme donc les enzymes de restriction ne les digère pas de la meme maniere.  [...]