• Santé - Restriction, Fragment, ADN, Enzyme

[Biologie Moléculaire] Enzymes de restriction VS fragment d'ADN

J'ai une petite question concernant le mode de fonctionnement d'une enzyme de restriction lors de la digestion d'un fragment d'ADN.  [...] Combien de paires de bases nécessite une enzyme de restriction de part et d'autre de son site de reconnaissance afin qu'elle puisse opérer la coupure du fragment dans les meilleures conditions.  [...]

[Biotechnologie] Enzyme de restriction

2.maintenant si une enzyme de type deux ce met sur un fragment methylé elle ne coupe pas ma question c est d ou est venu la methylation de l adn vu que c est l enzyme de restriction qui est aussi methylase.  [...] pour la 4 je sais. les enzyme de restriction son specifique a un palindrome (sequence d'adn invariante reconnu par l'enzyme de restriction) donc si il ya mutation au niveau de ce palindrome specifique l'ensyme de restriction ne coupera plus a cette endroit de l'adn.  [...]

[Biologie Moléculaire] Polymorphisme de restriction

Ce que vous appelez marqueur c'est simplement une mutation dans un site de restriction qui va faire qu'un fragment d'ADN, obtenu à partir d'un gène donné, va être coupé, ou non, par une enzyme de restriction, selon que le gène est sous la forme d'un allèle, ou d'un autre.  [...] En gros quand la mutation est présente l'enzyme de restriction est incapable de reconnaître son site de restriction et ne va pas le couper.  [...]

Sos....rflp

restriction. La coupure est alors détectée par Southern ou par coupure d'un fragment de PCR.  [...] RFLP sont les initiales de restriction fragment length PCR. C'est une technique qui consiste à amplifier un fragment d'ADN par PCR, puis de le soumettre à l'action d'une enzyme de restriction qui va couper les fragments amplifiés. Selon la présence et la position des sites de restriction, des amplicons qui semblaient identiques à première vue peuvent se révéler différents.  [...]

[Biologie Moléculaire] enzyme de restriction

est il possible d insérer un fragment d adn dans un plasmide linéarisé par une enzyme de restriction non palindromique.  [...] Oui c'est possible, à condition d'insérer un fragment d'ADN à extrémités cohésives.  [...]

[Biologie Moléculaire] plasmide recombinant et ADN ligase

comment recirculariser ton gros fragment pour former un nouveau plasmide. D'un côté tu as une partie du site de restriction AgeI, et de l'autre tu as une partie du site de restriction de EcoRV. Tes bouts sont entiers... (tu n'as pas de sticky ends ) Alors, quelle enzyme catalyse la ligation de deux fragments d'ADN.  [...] Enfin, tu veux que ton fragment se recircularise, c'est à dire que l'un de ses bouts se lie avec son autre bout... Autrement dit, tu veux favoriser une réaction intramoléculaire. Dans quelle condition cela est favorisé Il faut que tu choisisses une concentration optimale en ADN. élevée ou faible.  [...]

[Biologie Moléculaire] Erreur de taille sur SDS-PAGE

Deuxièmement je voudrais savoir si il fallait un distance minimum de part et d'autre d'un site de restriction pour que l'enzyme clive le double brin d'ADN. Là aussi je précise mon idée. J'ai un site de restriction qui se trouve 71pb avant la fin du fragment d'ADN et je voudrais savoir si c'est possible que l'enzyme ne le vois pas.  [...] Pour le SDS je ne sais pas.Mais pour la restriction, il ne devrait pas y avoir de problème.On peut bien creer des fragment PCR avec juste un site de clivage de chaque coté et les cliver ensuite.Je sais pas si mon exemple et très clair, mais toujours est-il que je suis quasi sur que ça ne posera pas de problème.  [...]

Banque d'ADN

Pour effectuer une banque d'ADNg d'un organisme, si j'ai bien compris, il suffit de mettre l'ADNg en présence d'une enzyme de restriction et de vecteurs. Nous nous retrouvons alors avec un ensemble de plasmides contenant chacun un fragment d'ADN.  [...] Mais alors, comment extraire un gène d'intérêt de cette banque, sachant que ce gène a sans doute été découpé en morceaux par l'enzyme de restriction et cloné dans différents plasmides Et lorsque nous l'avons extrait, comment l'assembler de nouveau de manière à obtenir la séquence initiale.  [...]

ADN de séquence inconnue, choix des enzymes de restriction.

Grosso modo, vous avez un fragment d'ADN que vous souhaitez faire rentrer dans un plasmide. Vous ne savez pas comment il a été obtenu, vous ne connaissez pas son état. Pour le faire entrer dans un plasmide, il va vous falloir ouvrir le plasmide en utilisant une enzyme de restriction dont il existe deux types.  [...] Comme vous n'avez aucune idée de la carte de restriction de votre fragment, il est déconseillé de digérer par une enzyme, vous risquez de le casser. En revanche, vous pourrez toujours l'insérer dans un plasmide ouvert avec une enzyme générant une extrémité franche, sous réserve qu'il ait lui même les extrémités franche. Or vous ne savez rien de cela.  [...]

[Biotechnologie] Construction plasmidique

Premièrement je digère un fragment d'ADN génomique avec les enzymes de restriction afin de récupérer le gène à intégrer.  [...] Tu récupère ton gène à intégrer dans ton plasmide en l'amplifiant par PCR, c'est ensuite que tu digére t'es amplifiants en utilisant les mêmes enzymes de restriction que tu utilise pour digérer ton plasmide.  [...]