• Santé - Restriction, Coupure, Fragment

[Génétique] Principe de la technique RFLP

Bon tout d'abord un fragment de restriction est un morceau de DNA qui a été coupé par un enzyme de restriction (enzyme coupant le DNA).  [...] Si une mutation intervient à cet endroit précis de reconnaissance de l'enzyme (par exemple un GTTC au lieu de GATC), il n'y aura plus de coupure, le gène B par exemple ne donnera que 4 fragment dont un sera beaucoup plus long. C'est ce qu'on appelle un RFLP ( restriction fragment lenght polymorphisme ou en français polymorphisme de longueur des fragments de restriction).  [...]

[Biologie Moléculaire] Enzymes de restriction VS fragment d'ADN

J'ai une petite question concernant le mode de fonctionnement d'une enzyme de restriction lors de la digestion d'un fragment d'ADN.  [...] Combien de paires de bases nécessite une enzyme de restriction de part et d'autre de son site de reconnaissance afin qu'elle puisse opérer la coupure du fragment dans les meilleures conditions.  [...]

Sos....rflp

je voudrais avoir des informations concernants les RFLP, c'est qu'on a fait un cours dessus et j'ai pas bien pigé.. j'ai cru comprendre que c'est des marqueurs génétiques pour détécter les mutations à l'origine des maladies,ils sont obtenus par Southern Blot ou PCR en cas de microsatellites..et la notion du PIC.   [...] restriction. La coupure est alors détectée par Southern ou par coupure d'un fragment de PCR.  [...]

Enzyme compatible, non compatible

- On dispose de 2 enzymes de restriction compatibles lorsqu'elles produisent des fragments de restriction qui peuvent s'associer par complémentarité des bases si ce sont des extrémité cohésives, mais qu'en est t'il lorsque ce sont des extrémités franches.  [...] - En rapport avec le plasmide. pourquoi est ce que l'on utilise pas la meme enzyme de restriction dans la bactérie pour créer la meme coupure et ainsi faciliter l'insertion du fragment de restriction Pourquoi en utiliser 2 bien qu'elles soient compatibles.  [...]

Carte de restriction

Bonsoir, je n'arrive vraiment pas à comprendre la notion de carte de restriction, en fait il y a un exemple particulier qui me tracasse, disons que nous avons une portion d'ADN à étudier et que nous avons deux cas deux figures qui se présentent soit la formation soit l'abolition d'un site de restriction et nous allons faire une double digestion avec deux enzymes.  [...] Disons que l'enz 1 coupe aux deux extremités et le site de restriction sur lequel va agir une enz2 soit formé soit aboli va se trouver au milieu, d'apres ce que j'ai compris, si le site est aboli= pas de coupure au milieu par l'enz2 et nous aurons juste les coupures aux extremités par l'enz1 ce qui va former un seul fragment, maintenant si on l'hybride avec une sonde, qui s'hybride avec la partie vers le milieu de le séquence on aura logiquement un seul trait dans l'electrophorse non vu que la sonde va s'hybrider avec le fragment.  [...]

[Biologie Moléculaire] Sites de restrictions proches sur vecteur

Je voulais donc savoir si BamHI peut cliver son site de restriction lorsque celui ci se trouve trop à l'extrémité d'un fragment d'ADN Je précise aussi que les 6 bases de la séquence palindromique de BamHI sont bien présentes après clivage par XhoI.  [...] Merci IngDr pour ce lien super. J'étais allé sur le site de NEB mais visiblement je n'avais pas assez fouillé...Je vois que les deux enzymes que je veux utiliser clivent à 97% un fragment où une seule base est présente après le site de restriction...donc j'ose espérer que sans base, il y aura suffisamment de coupure.  [...]

[Biologie Moléculaire] La carte de restriction

Si ton ADN est linéaire et que la digestion par une enzyme (exemple Bam HI) génère deux fragments (de 14 et 1 kpb), ça veut dire qu'il n'y a qu'un seul site pour cette enzyme =) comme un fil qu'on coupe en deux une seule fois. on se retrouve avec deux morceaux.  [...] La coupure EcoRI permet d'obtenir deux fragments, donc il y a un seul site EcoRI. C'est concordant avec coupure par deux enzymes qui génère 3 fragments (un site de restriction pour chaque enzyme).  [...]

[Biologie Moléculaire] Site de restriction

Une coupure de l'ADN peut être engendré soit mécaniquement ou par des agents chimiques mais dans ce cas là on coupera l'ADN de façon aléatoire on ne pourra pas prédire l'endroit où ça va se casser tandis qu'avec une enzyme de restriction on coupe l'ADN à l'endroit où sera son site de restriction.  [...] Selon moi, la chose relève plutôt de l'endroit où se produit la coupure, pas des agents. Surtout, je ne vois pas comment un site de restriction sera présent sans que le site de coupure y soit (mutation ponctuelle exclue).  [...]

[Biologie Moléculaire] Prédiction de coupure d'un génome par des enzymes de restriction

Je me tourne vers la communauté pour savoir si l'un d'entre vous connait un site permettant de prédire le nombre de coupures d'un génome entier de bactéries (4Mb) par des enzymes de resctrictions.  [...] Je viens de tester Webcutter, il n'arrive pas à utiliser le numéro d'accès Genbank de mon génome. Ca risque d'être compliqué de tester gène par gène sans parler de l'interprétation des résultats. Merci quand même, je le garde pour les gènes, il est vraiment complet à ce niveau là.   [...]

Southern blot et séquençage - Interprétation

Je suis en licence droit gestion et en parallèle je suis une licence de biologie à distance. Malheureusement les profs ne peuvent pas répondre à mes questions pendant ces vacances.   [...] Le site de reconnaissance de l'enzyme de restriction Xho I est. C*TCGAG (* = site de coupure).  [...]