• Santé - Restriction, ADN, Vecteur, Longueur

transgénèse végétale

Dois-je prendre des primers qui ont un site de restriction bien spécifique pour pouvoir mettre l'ADN amplifié dans le vecteur ti désarmé après Quel doit être la longueur du primer environ.  [...] Le promoteur 35S faut-il que je le clone aussi dans le vecteur ou est il généralement déjà dans les plasmide ti désarmé avec un site polylinker Si quelqu'un connait un site ou il y a un schéma ce serait super.  [...]

[Biologie Moléculaire] marqueurs moleculaires

Alors dire polymorphisme RFLP c'est redondant car dans RFLP il ya déjà écrit polymorphisme (Restriction fragment length polymorphism=Polymorphisme de longueur des fragments de restriction).  [...] De l'ADN est coupé en fragments par une enzyme de restriction, cette dernière coupant l'ADN au niveau d'une séquence qui lui est spécifique (site de restriction). Les fragments d'ADN ainsi obtenus, nommés fragments de restriction, sont ensuite séparés selon leur longueur par électrophorèse sur gel d'agarose, on obtient un profil.  [...]

[Biochimie] PCR & Southern Blot

D'après ce que j'ai compris, tout comme le southern blot, la PCR permet de déterminer la longueur (nombre de bases) d'une molécule d'ADN, préalablement traitée par des enzymes de restriction.  [...] Si, si tu le fais migrer en même temps qu'un marqueur de poids moléculaire = mélange de fragments d'ADN de taille connue (cela peut être un ADN de ta collection digéré par des enzymes à ta convenance).  [...]

microbiologie (sens anti-sens)

tu définis si c'est sens ou anti-sens selon la longueur des segment d'ADN (traité pas l'enzyme de restriction).  [...] .) qui va coupé a des site bien précis, on aura plusieurs fragment d'ADN, on met les fragment dans un gel d'agarose par exemple et on laisse les fragment migré(cartographie de restriction)===. au final au aura la taille (base) de chaque fragment.  [...]

Intégration dans un plasmide

L'intégration de séquence d'intéret ( un ou plusieurs gènes ) se fait par technique d'ADN recombinant. En gros, tu vas utiliser des endonucléases ( ou enzymes de restriction) qui font créer des extrémitées cohésives ( pouvant être ligasé par une ADN ligase ) sur ta séquence d'intérêt et sur ton vecteur plasmidique.  [...] La souche bactérienne la plus utilisée en tant que vecteur est Escherichia coli K12. Son système de recombinaison est altéré ce qui permet de prévenir les réarrangements incontrôlés des clones. De plus, ces souches sont dépourvues d'endonucléases de restriction pour ne pas altérer l'insert.  [...]

Mémoire en génétique : questions diverses

Ces derniers jours, j'étudie les empreintes génétiques, notamment le polymorphisme de l'ADN, les SNP et les séquences répétées en tandem. Je souhaite parler du polymorphisme de longueur des fragments de restriction, mais j'ai beau faire des recherches, je ne comprends absolument pas de quoi il s'agit.  [...] L'ADN est toujours susceptible d'être couper par des enzymes de restriction s'il n'est pas protégé. Les enzymes de restriction sont des outils utilisés pour couper l'ADN en des sites bien précis, Ces enzymes sont des endonucléases.  [...]

Technique : RFLP

L'objectif de la RFLP (Restriction FRagment Lenght Polymorphism pour Polymorphisme de longueur des fragments de restriction) est de mettre en évidence des variances alléliques.  [...] tu as dis précédemment que l'adn était coupé en point x (car site de restriction) et cela donnait des fragments. Soit, mets tu dis que s'il y a absence de ce site alors il y a migration de fragments plus courts ce ne serait pas le contraire par hasard, car si présence de site de restriction alors ca coupe donc longueur moindre que s'il n'y avait pas de site.  [...]

[Biologie Moléculaire] précipitation de l'ADN diminution de la taille de mon fragment!!!

je digère un vecteur d'environ 6000pb avec une enzyme de restriction qui coupe une seule fois dans ce vecteur. je vérifie ma digestion sur gel d'agarose...une belle bande à 6000pb. je décide de précipiter (avec de l'éthanol) l'ADN sur la nuit. le lendemain, je re-dépose sur gel.  [...] Serait-il possible que ton endonucléase de restriction ait une activité qui puisse être modifiée en présence de fortes teneurs en éthanol (admettons une gène sur le site de reconnaissance) entraînant un mésappariement et la catalyse d'une coupure non spécifique.  [...]

[Génétique] Principe de la technique RFLP

SVP si quelqu'un pourrai m'expliquer le principe de la technique RFLP ( le polymorphisme de longueur des fragments de restriction de l'ADN ), et comment il sert à l'etablissement des caryotypes ainsi que la detection de certaines maladies génétiques.  [...] Si une mutation intervient à cet endroit précis de reconnaissance de l'enzyme (par exemple un GTTC au lieu de GATC), il n'y aura plus de coupure, le gène B par exemple ne donnera que 4 fragment dont un sera beaucoup plus long. C'est ce qu'on appelle un RFLP ( restriction fragment lenght polymorphisme ou en français polymorphisme de longueur des fragments de restriction).  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

la séquence de ton ADN doit être coupée des deux bords avec la même enzyme que tu utilise pour linéariser le vecteur..de plus, ton site de restriction doit être localisé sur un marqueur de séléction.  [...] Vous cherchez un vecteur qui va permettre d'exprimer votre protéine d'intérêt Sans même regarder la carte de restriction et s'y connaître même un minimum en biologie moléculaire, on peut lire ceci dans la première phrase des documents qui vous sont fournis pour chacun des vecteurs.  [...]