• Santé - Restriction, ADN, Bactérie

[Biologie Moléculaire] Contamination d'ARN par de l'ADN

Après votre PCR, procédez à une digestion enzymatique de vos produits par l'enzyme de restriction DpnI. L'intérêt est que cette enzyme coupe un site de 4pb (donc très fréquent) uniquement quand celui ci est methylé. Du coup vous coupez le plasmide qui a été méthylé lors de sa production en bactérie mais pas vos produits PCR.  [...] Je ne pense pas que digérér par DpnI après l'amplification soit utile dans la mesure ou il s'agit d'une RT PCR, possiblement contaminée par de l'ADN génomique, et non de l'amplification d'un ADN venant d'une bactérie. Ceci dit, si tu soupçonnes un problème de DNAse, tu peux prédigérer tes échantillons par une enzyme de restriction (avant de faire la PCR).  [...]

[Biochimie] Bacterie E.Coli

...c'est pour simple raison..car la bactérie echerichia coli nessicite pas bcp d'element nutritifs..et car elle vit dans un simple milieu qui contient des elements simple...et pour autre raison...c'est la reproduction de E.coli s'effectuée dans un temps tres limité.  [...] Voilà, c'est plutot sa la réponse, on utilise E.Coli car c'est une bactérie courante, qui ne présente pas d'exigeances nutritive, qui a un temps de génération rapide (20 à 40 min) et qui est compétente, de plus on utilise beaucoup E.coli car on l'a connait par coeur au niveau de sa structure d'ADN et on a beaucoup d'enzyme de restriction efficace pour l'inclusion des vecteurs plasmidiques.  [...]

Enzymes de restriction

Parce que l'ADN de la bactérie est méthylée au niveau de certaines séquences bien spécifiques (plus particulièrement sur les adénines et les cytosines), ce qui permet aux enzymes de restriction de reconnaître l'ADN bactérien et donc de ne pas le couper.  [...] non les enzymes de restrictions coupent l'ADN bactérien, sauf celui de la bactérie qui synthetise naturellement l'enzyme. Cette bactérie peut etre protégée de la digestion soit par méthylation (mais ca ne permet pas de tout expliquer car bcp d'enzymes ne sont pas sensibles a la methylation), soit tout simplement parceque le site n'existe pas dans le génome.  [...]

Composition d'une cellule souche

Elle est aussi utilisée quand l'ADN à integrer est deja méthylé et qu'il risque d'être dégradé par la bactérie (fragments de virus). Enfin c'est ce que j'ai vu dans les abstracts de plusieurs publis en essayant de chercher la signification exacte de MCR.  [...] C'est un systeme de protection contre l'ADN exogene (comme les phages par expl). Cet ADN ne possede pas le meme pattern de methylation que celui de la bacterie donc le systeme de restriction de la bacterie doit pouvoir fragment l'ADN avant que celui ci ne s'exprime.  [...]

[Divers] clonage et maths

Le problème avec le clonage d'un fragment d'ADN c'est que le matériel n'est pas classiquement présent dans un lycée (pas de bactérie, pas de plasmide, pas d'enzyme de restriction). Vous pourriez éventuellement tenter de trouver un labo qui veuille bien vous accueillir 3 demies journées pour vous faire faire un clonage (il serait bien sympa ce labo).  [...] On retrouve aussi des math au moment où l'on s'intéresse à combien d'enzyme on met (restriction, ligase) et combien on a de sites, de restriction, de ligation, combien de temps on veut prendre etc... Jusque là c'est finalement que des changements d'unités, des règles de trois.  [...]

Définition | Enzymes de restriction | Futura Santé

Ces enzymes sont des endonucléases. elles possèdent donc un site actif d' hydrolyse de l'ADN, mais aussi un site de reconnaissance de la séquence cible, aussi appelée site de restriction.  [...] Produites par les bactéries, les enzymes de restriction sont un moyen de se défendre contre les infections par des virus. En effet, elles coupent en petit morceaux l' ADN de ces intrus, ce qui restreint leur infectiosité (d'où le nom de ces enzymes). Les bactéries sont elles-mêmes protégées par ces enzymes car elles méthylent leur propre génome, ce qui empêche les enzymes de reconnaître l'ADN bactérien comme une cible.  [...]

Enzymes de restriction

j'ai besoin de l'aide, comment les enzymes de restriction coupent dans l'adn des bactéries.  [...] Les ER sont capables de reconnaître spécifiquement une courte séquence de l'ADN, et de cliver les deux brins d'ADN au site reconnu, elles permettent de fragmenter l'ADN en segments de taille réduite en coupant à des sites définis.  [...]

[Génétique] Thérapie génique: synthétiser le gène correcteur

En bref l'enzyme de restriction va permettre le clivage de l'ADN par rapport au site de restriction. Ensuite les fragments d'ADN sont séparés (ou différenciés) par électrophorèse.  [...] Merci beaucoup. J'ai une autre question. Comment fait-on pour insérer le fragment d'adn obtenu par les enzymes de restriction dans le vecteur.  [...]

Dénaturation de l'adn en pH acides

D'ailleurs en parlant de dénaturation de l'ADN, on parle souvent de digestion par des enzymes de restriction de l'ADN avant des techniques de séquençages comme des Southern blot etc.  [...] Pas necessairement, souvent n'importe quelle enzyme de restriction coupera n'importe quel ADN genomique. Cependant il y a certaines limites. Par exemples.  [...]

microbiologie - CARTE DE RESTRICTION

Voilà, je n'ai jamais suivi de cours de bio depuis le lycée, et mon prof me demande de faire une carte de restriction sans m'expliquer ce qu'était le phénomène. une digestion de restriction, un adn plasmidique circulaire, bref j'ai dû mal à me représenter de quoi il s'agit.  [...] Generalement les bacteries synthetise des enzymes de defence.ENZYMES DE RESTRICTION qui degrade tout ADN etranger.ces enzymes sont utilisé dans le clonage dans la coupure de l'adn plasmidique pour inséré un fragement d'adn.  [...]