• Santé - Résistance, Protéine, Plasmide

[Microbiologie] transformation bactérienne

On transforme avec un plasmide qui contient en général plusieurs gènes. Un gène de résistance pour sélectionner les bactéries transformantes, et un gène d'intérêt (pour l'expression d'une protéine par exemple).  [...] Rien ne nous empêche de transformer une cellule bactérienne avec plusieurs vecteurs, ou d'insérer sur un même vecteur plusieurs gènes d'intérêt. Mais votre question nécessite quelques précisions.   [...]

[Biologie Moléculaire] Contamination transformation

Cas typique avec les transformants sur ampicilline. le gène de résistance à l'ampicilline qui est sur ton vecteur code une protéine qui peut diffuser dans le milieu et conférer une pseudo-résistance à des cellules qui n'ont pas ton plasmide, donc des faux-positifs.  [...] Je ne récupère aucun ADN plasmidique...il n'y a pas forcément d'ADN plasmidique dans des bactéries... Ce qui veut dire que ma contamination provient d'une bactérie résistante à l'antibiotique mais qui n'a pas intégrer un plasmide parasite issu du labo porteur de la résistance Ampi.  [...]

[Génétique] Conséquence de l'intégration d'un vecteur dans une bactérie

Seule exception. quand on transforme une souche avec un plasmide, il faut la laisser un moment (45 minutes il me semble) en milieu non sélectif, pour qu'elle ait le temps d'exprimer la protéine de résistance. Mais elle n'a alors pas le temps de se diviser et de perdre le plaqmide.  [...] Cela ne l'est pas dans une population de milliards de milliards de cellules se reproduisant vite, une petite différence au départ peut conférer finalement un avantage non négligeable. Sans parler des questions de plasmide multi-copies. C'est un principe général, on enlève la pression de sélection, le gène de résistance subit la dérive, voire même est contre-sélectionner si son maintien/ expression a un coup.  [...]

Les colonies satellites dans un milieu aditionné d'Ampicilline

Si tu veux sélectionner les bactéries sensibles à l'amp, tu dois procéder comme ça. (donc pour rappel, tu cherches les bactéries amp sensibles, antibio 2 resistantes, antiobio 3 resistantes cad a dire portant le plasmide ou la résistance a l amp est altérée par un insert (mais les deux autres restent effectives).  [...] Dans un transformation classique (que ce soit avec des cellules électrocompétentes ou avec des chemocompétentes), tu dois laisser 1h tes bactéries dans du LB liquide (le temps que les bactéries qui possèdent le plasmide puissent exprimer la protéine donnant la résistance).  [...]

[Biotechnologie] ADN recombinant réplication dépend du cycle cellulaire ?

En fait l' ADN recombinant qui est composé de plasmide qui est le vecteur et de l'ADN inséré ainsi que d'autre gène inséré dans ce vecteur comme le gène de résistance à l'ampicilline le gène marqueur lactZ qui code pour la protéine béta galactosidase et le polylinker qui s'insère dans le gène marqueur lactZ sans influencé son fonctionnement, bref en gros lors de l'injection de l'ADN recombinant dans les cellules hote comme e.  [...] C'est d'ailleurs une propriété qu'on utilise pour augmenter le rendement de production de plasmides, en bloquant spécifiquement la réplication chomosomique sans gêner celle du plasmide.  [...]

[Biologie Cellulaire] A quoi sert le co-transfert avec un vecteur de résistance à un antibiotique

La meilleure méthode est quand même d'avoir un gène de résistance dans le plasmide où tu as ton gène d'intérêt, ça te permet de minimiser le nombre de clones faux-positifs (uniquement résistant et sans gène d'intérêt).  [...] C'est pour faire un transformant stable exprimant ton gène d'intérêt. L'idée est de transfecter avec un vecteur codant pour une protéine de resistance à un antibio. Ce vecteur va s'intégrer (évenement très rare), et les transformants (ayant intégré le vecteur de manière stable) seront resistants à une sélection à l'antibiotique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Exprimer une protéine fonctionnelle en plasmide

Pour m'assurer que ma protéine est fonctionnelle je dois insérer la séquence de mon cDNA du codon ATG au codon stop… jusque là ok.  [...] Mais seul le cDNA suffit à exprimer la protéine nan En considérant biensur que le promoteur soit déjà dans le plasmide Parce que en fait je ne comprends pas bien l'histoire de l'intron avant l'ATG.  [...]

sélection par résistance à un antibiotique ou agent extérieur

Bonsoir à tous, je ne comprends pas en quoi devenir plus résistant à un antibiotique ou un agent toxique permet de vérifier qu'une cellule hôte dont on veut introduire un gène d'intêret ait bien été intégré.  [...] Pour vérifier la bonne transfection de tes bactéries (par exemple) par ton plasmide ayant le gène d'intérêt, en ayant un gène de résistance à un antibiotique dans ton plasmide, tu vas sélectionner uniquement les cellules ayant reçu le plasmide, car.  [...]

plasmide-clonage

En les faisant pousser sur milieu complet + ampiciline, seul les bactéries avec le gène de résistance contenu dans le plasmide survivront.  [...] on met ensuite le plasmide dans des bactéries qui n'ont pas justement de géne re resistance a l'antibiotique, ce qui permet de localiser celle qui ont reçu le plasmide.  [...]

[Biologie Cellulaire] transposons, qui permettent la résistance bactérienne

Voilà, on dit que les transposons permettent la résistance bactérienne (encore plus que les plasmides). Or, un plasmide porte également des gènes de résistance. Par conjugaison, la bactérie est capable de le transmettre à une autre bactérie, tout en gardant plusieurs copies.  [...] Donc, la résistance se propage. De plus, lors des divisions cellulaires, le plasmide est également copié. Alors quel est l'intérêt d'un transposon Pourquoi dit-on qu'un transposon favorise la résistance bactérienne (étant donné qu'il a les mêmes atouts qu'un plasmide) Qu'est-ce que son déplacement entre le plasmide et le chromosome permet, d'autant que cela peut entraîner des mutations.  [...]