• Santé - Résistance, Plasmide, Intérêt

[Biologie Cellulaire] A quoi sert le co-transfert avec un vecteur de résistance à un antibiotique

La meilleure méthode est quand même d'avoir un gène de résistance dans le plasmide où tu as ton gène d'intérêt, ça te permet de minimiser le nombre de clones faux-positifs (uniquement résistant et sans gène d'intérêt).  [...] Donc, utiliser un seul plasmide, tu augmentes tes chances d'intégrer ton gène de résistance et ton gène d'intérêt, et donc probablement passer moins de temps à trouver un clone stable.  [...]

Définition | Clonage | Futura Santé

Une fois que le gène d'intérêt a été isolé, il faut l'insérer dans un vecteur, qui peut être un plasmide bactérien. Souvent ces plasmides portent des gènes de résistance aux antibiotiques pour faciliter leur sélection. Le gène est inséré dans le plasmide et ce dernier est introduit dans une bactérie, comme Escherichia coli.  [...] Les bactéries portant le plasmide recombiné sont clonées. le clone bactérien portera un grand nombre de copies du gène d'intérêt porté par le plasmide.  [...]

[Biologie Cellulaire] Stabilité d'une transfection

Je transfecte des cellules rétroviral avec un plasmide adapté auquel j'ai intégré mon gène d'intérêt ainsi qu'un gène de résistance au G418.  [...] parce que si tu fais une intégration dirigée tu peux linéariser ton plasmide et déphosphoryler. Je n'ai jamais utilisé cette technique avec la lipofectamine, les cellules sur lesquelles je travaille doivent être électroporées.  [...]

[Microbiologie] transformation bactérienne

On transforme avec un plasmide qui contient en général plusieurs gènes. Un gène de résistance pour sélectionner les bactéries transformantes, et un gène d'intérêt (pour l'expression d'une protéine par exemple).  [...] Rien ne nous empêche de transformer une cellule bactérienne avec plusieurs vecteurs, ou d'insérer sur un même vecteur plusieurs gènes d'intérêt. Mais votre question nécessite quelques précisions.  [...]

[Biologie Moléculaire] Proteines recombinantes

En réalité l'insuline a 2 chaînes polypeptidiques reliées par des ponts disulfures. En pratique on va mettre 2 transgènes dans E.coli (donc deux constructions plasmidiques différentes), un pour chaque chaîne. Et pas n'importe comment. Déjà les deux plasmides auront un gène de résistance à l'ampicilline, un antibiotique.  [...] Dans un premier temps E.coli va croître dans un milieu sans lactose et en présence d'ampicilline. Cela permet d'éliminer les bactéries n'ayant pas intégré le plasmide recombinant (et donc le gène de résistance) et d'obtenir les bactéries d'intérêt, sans transcrire la beta-galactosidase et la chaine d'insuline.  [...]

plasmide-clonage

En les faisant pousser sur milieu complet + ampiciline, seul les bactéries avec le gène de résistance contenu dans le plasmide survivront.  [...] on met ensuite le plasmide dans des bactéries qui n'ont pas justement de géne re resistance a l'antibiotique, ce qui permet de localiser celle qui ont reçu le plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Le plasmide a t'il l'insert?

Dans ce plasmide, on veut cloner au site EcoRI un fragment d'ADN génomique de Salmonella portant le gène neoA (homologue à Salmonella) et qui confère une résistance à la néomycine.  [...] Les clones vides sont résistants alors que les clones+ plasmides ont perdu cette résistance (on a cassé le gène en insérant notre fragment). Par comparaison on retrouve nos clones intéressants.  [...]

[Biochimie] Problème de transformation

Pour savoir ce que c'est qui pousse... des colonies transparentes, aucune idée. mais ca peut être des contaminant. certaines bactéries peuvent développer rapidement une résistance à la kanamycine, surtout dans un labo ou cet antibio est utilisé couramment.  [...] D'où l'intéret de toujours vérifier que les colonies que tu isoles sont résistantes en raison de la présence du plasmide, et non d'une mutation spontanée. Ceci dit, si tes bactéries 'transparentes' ne poussent pas quand tu les repiques, ca veut dire que c'est des faux positifs.  [...]

[Biologie Moléculaire] organisation plasmide

Dans un plasmide expression( rapporteur). il y a un gene de résistance pour le sélectionner, une origine de réplication, un MCS et par exemple le gène lacZ juste apres.  [...] En fait tout dépend de ce que tu cherches à faire et du type de plasmide utilisé. De ce que j'ai pu voir, la plupart du temps on utilise un plasmide contenant un promoteur d'intérêt et on place dans le MCS le gène d'intérêt.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transfert de résistance

Je fais mon liquid mating, l'obtient des transconjugants résistants mais je ne retrouve pas forcément le plasmide... Premier problème. A ma connaissance, une bactérie ne peut transférer sa résistance que par le biais d'un plasmide, non Alors comment mes souches deviennent résistantes Estce qu'elle peuvent intégrer le plasmide aussi rapidement.  [...] Je me dit soit le plasmide n'à rien à voir avec la résistance (mais j'en revient au 1er problème, comment mon transconjugant est devenu résistant), soit le plasmide n'est pas exprimer correctement par ma souche, soit il est létale. Le problème ici c'est que je ne sait pas comment aller plus loin.  [...]