• Santé - Résistance, Cellules, Plasmide

[Biologie Cellulaire] Compter les passages

Bon en fait j'ai une lignée qui exprime une récepteur calcique transfecté avec un plasmide comprenant une résistance (G418) Donc à chaque passage, je dois avoir des cellules exprimant assurément le plasmide (autrement ils n'auraient pas la résistance et mourraient) et donc le récepteur en question.  [...] En résumé, même si tes cellules sont résistantes au G418, il est possible qu'elles n'expriment plus ta protéine suite à une mutation de sa séquence, ou du promoteur. Une autre hypothèse comme je l'ai dit précédement est que certains promoteurs sont sensibles aux métabolites secondaires produits durant la vie de la cellule, et qu'ils s'inhibent au fur et a mesure.  [...]

proteine ou cellule stable ???

ii) transfecter stablement avec un plasmide qui contient le gène d'intérêt et un gène de résistance, on ajoute un agent de sélection, donc seuls les cellules qui possèdent le plasmide survivent, et au final, il y aurait intégration du plasmide dans le génome.  [...] Pour les SV40, je ne suis pas spécialiste, (et j'ai peur d'avoir déjà fait du hors sujet...) je pense que tu devrais regarder comment il rend immortel les cellules de mammifère.  [...]

[Biologie Cellulaire] A quoi sert le co-transfert avec un vecteur de résistance à un antibiotique

En fait, on fait une co-transfection car ton plasmide ou se situe ton cDNA ne contient surement pas de gène de résistance. Dans ce cas là, si tu veux sélectionner par la suite uniquement les cellules qui ont intégré le plasmide, il te faut pouvoir les sélectionner.  [...] J'ai pas trop compris IngDr où tu n'étais pas d'accord... Si tu utilises deux plasmides (1 résistance et 1 gène d'intérêt), si tu n'as pas de bol. des cellules peuvent avoir la résistance sans le gène d'intérêt (et là, tu vas galérer pour trouver des clones stables.  [...]

Qu'est-ce qu'un OGM : organisme génétiquement modifié ? | Dossier

Si le plasmide possède un gène de résistance aux herbicides, ceux-ci peuvent être utilisés pour sélectionner uniquement les cellules porteuses du plasmide. Cependant cette stratégie de sélection est maintenant couramment remplacée par d'autres moyens de sélections n'utilisant ni les antibiotiques, ni les herbicides.  [...] La mise au point des plasmides a été fortement améliorée ces dernières années. Maintenant il est possible d'éliminer du plasmide tous les gènes de sélection utilisés dans les bactéries. Ainsi la cellule nouvellement OGM, ne possède pas de gène de résistance aux antibiotiques qui risquerait d'être disséminé dans la nature.  [...]

[Biologie Cellulaire] Stabilité d'une transfection

Je transfecte des cellules rétroviral avec un plasmide adapté auquel j'ai intégré mon gène d'intérêt ainsi qu'un gène de résistance au G418.  [...] parce que si tu fais une intégration dirigée tu peux linéariser ton plasmide et déphosphoryler. Je n'ai jamais utilisé cette technique avec la lipofectamine, les cellules sur lesquelles je travaille doivent être électroporées.  [...]

[Biologie Moléculaire] Décision de replication de l'ADN

On a construit le plasmide suivant. ORIcolE1, gène conférant résistance à l'Amp, gène de sélection chez les Levures ( ura3 + ), en insert = fragment d'ADN génomique de S. cerevisiae. On a procédé à une transformation des cellules de S. cerevisiae [ura - ] par cette construction.  [...] Il y a deux cas possibles. soit le plasmide contient une origine de réplication reconnue par la machinerie de la Levure et dans ce cas on aura une prolifération des cellules l'ayant, soit le plasmide n'en contient pas et les cellules ne survivront pas.  [...]

Plasmide recombinant

On selectionne deja sur la résistance les cellules portant le plasmide. On a donc dans le lot des cellules qui portent le plasmide et des cellules qui ont recombiné. Ce que l'on veut maintenant c'est n'avoir plus que les cellules qui ont recombinées. Du coup on va les tester avec le gène de sensibilité à l'antibiotique.  [...] Si le gène est encore sur le plasmide, elles sont sensibles et meurent. Si il est recombiné, les cellules ne sont pas sensibles à l'antibiotique et résistent.  [...]

[Biologie Moléculaire] Contamination transformation

Cas typique avec les transformants sur ampicilline. le gène de résistance à l'ampicilline qui est sur ton vecteur code une protéine qui peut diffuser dans le milieu et conférer une pseudo-résistance à des cellules qui n'ont pas ton plasmide, donc des faux-positifs.  [...] non pas du tout...je ne veux pas intégrer le gène de résistance. En fait j'ai des bactéries résistantes à l'ampi qui poussent sur mes boites ainsi qu'en culture liquide et qui n'ont rien à voir avec mes plasmides ou d'autres plasmides manipulés au labo.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transduction/transfection

Les cellules font aussi des recombinaisons heterologues. Pour les selectionner, on utilise generalement de la puromycine (le vecteur possede le gene de resistance). Alors seules les cellules qui auront intégré aleatoirement ce plasmide dans leur chromosome pourront survivre. On obtient donc des lignées stables.  [...] ) cellule(s) fasse une recombinaison hétérologue (donc integre le gène dans son ADN) et qu'on la sélectionne grâce à la resistance associée au gène en question... Du coup, plus il y a de cellules, plus on aura de chance de choper celle qui fait la recombinaison qui nous interesse.  [...]

Les colonies satellites dans un milieu aditionné d'Ampicilline

Et quand j'ai étalé cette solution dans un milieu LB+Amp il y a eu formation de colonies satellites. Devrai-je déduire que c'est les cellules transformées qui forment des colonies satellites et que les petites colonies formées autour correspondent aux cellules non transformées qui portent la résistance à l'antibiotique.  [...] Dans un transformation classique (que ce soit avec des cellules électrocompétentes ou avec des chemocompétentes), tu dois laisser 1h tes bactéries dans du LB liquide (le temps que les bactéries qui possèdent le plasmide puissent exprimer la protéine donnant la résistance).  [...]