• Santé - Réplique, Colonies, Membrane

[Biochimie] Dot Blot et Northern Blot

A part la membrane, il n'y a finalement aucune similitude. La question que je ne m'étais jamais posé c'est est ce que l'on a fait des dot blot avec autre chose que des protéines (Je n'ai jamais pratiqué ou vu que cette application).  [...] Mais c'était un dot blot ou un colony lift Moi quand j'ai eu à screener la présence d'un gène comme tu l'as fais j'ai préféré le colony lift (réplique des colonies sur une membrane nitrocellulose puis en gros l'équivalent d'un southern blot). En revanche je n'ai pas déposé directement l'ADN extrait de chacune des colonies gouttes à gouttes sur la membrane.  [...]

[Biologie Moléculaire] Promoteur banque BAC

Si elle est sur gélose, tu fait une réplique sur membrane de nitrocellulose c'est à dire que tu découpes une membrane de nitrocellulose de la taille de la gélose, tu la déposes sur la gélose de manière à ce que les colonies fasse bien contact avec la réplique.  [...] Ainsi tu as des bactéries sur la membrane de nitrocellulose. Ensuite, tu réalise une hybridation de sondes chaudes spécifiques de ton promoteur, tu révèles en autoradiographie et tu vois quelles colonies sont marquées. Pour être sûr que ton promoteur est entier, tu peux éventuellement faire deux répliques.  [...]

Isoler une région d'un génome à partir d'un BAC

Le probleme du criblage de BAC par PCR viens notamment du tres grand nombre de clone que tu vas devoir repiquer et analyser en PCR. ca va etre long. Une technique plus rapide et tout aussi efficace est d'effectuer une replique de tes colonies sur une membrane et d'effectuer une hybirdation avec une sonde radioactive (ou froide) spécifique de ton gène d'interet.  [...] Cela va deja te permettre d'identifier les colonies possédant un BAC avec ta region d'interet. Ensuite seul le sequençage te permettra de t'assurer que tu as l'integralite du gene recherché, car comme il proviens de la souris tu travailles tres probablement avec une banque de BAC contenant du cDNA et tu n'es jamais a l'abri de problemes techniques lors de la reverse transcription (ou que tu ARNm soit epissé alternativement, ou possede plusieurs initiation/termination transcriptionelle.).  [...]

Hybridations plasmides et sondes

Cette manip te permet de visulaiser quelles colonies (et donc quels plasmides) contiennent ta sequence d'interet (tu auras un spot noir sur ta photo). Ensuite, il ne te reste plus qu'à recuperer les colonies identifiées sur ta deuxieme boite de petri (identique à ta membrane de nitrocellulose puisque replique), a les relancer en milieu liquide pour en extraire l'ADN plasmidique (manip 2).  [...] Oui exactement, tu fais ca via un velour (buvard). Generalement, tu place ton velour sur l'appareil de replication, tu appliques sur ta boite d'origine, tu passes ensuite vers ta membrane, et avec le meme velour tu finis sur une boite de petri neuve. Utiliser le meme velour pour toutes repliques te permet de controler la qualite de ta replication.  [...]

[Microbiologie] isolement de bactérie

Juste pour apporter une ou deux précisions. Cette technique s'appelle une réplique ou réplique sur velours car tu utilises un morceau de velours pour prélever les colonies puis les répliquer sur une gélose neuve.  [...] Sinon, plus simplement, tu pars d'un milieu non sélectif sur boite de petri. Tu choisis un ensemencement permettant un maximum de colonies bien isolées. Et tu repiques ces colonies au cure dent sur un milieu selectif. Celle(s) qui ne pousse(nt) pas est(sont) la(les) bonne(s).  [...]

Esther Lederberg, pionnière méconnue de la génétique bactérienne

Esther Lederberg a, entre autres, découvert le virus bactériophage lambda et les échanges de gènes entre bactéries. Travaillant avec son mari, elle a aussi mis au point la technique de réplique de colonies bactériennes par tampon de velours, toujours utilisée aujourd'hui.  [...] Esther Lederberg a obtenu sa maîtrise à Stanford en 1946 et soutenu sa thèse à l'université du Wisconsin. Avec son premier mari, Joshua Lederberg, elle a développé la réplique sur plaque, une technique déconcertante de simplicité encore utilisée aujourd'hui dans les laboratoires de génétique, qui leur a permis de démontrer le caractère spontané des mutations bactériennes.  [...]

Le thé : un médicament contre le VIH ?

Ces récepteurs membranaires permettent au virus du SIDA de s'introduire dans les cellules, ou il est ensuite répliqué.  [...] Cette molécule ouvre une nouvelle voie de lutte contre la maladie en empêchant le virus de se répandre dans les cellules, les traitements actuels combattant le virus après sa propagation dans l'organisme.   [...]

[Biochimie] Expérience sur les processus d'apparition de la vie.

Ce système évolue, c'est indéniable, et cette évolution n'est pas l'évolution biologique. Or il ne possède pas (encore) de réplicateurs. Les mèmes de Dawkins ne sont pas des réplicateurs, juste des répliqués, à l'instar d'une protéine ou d'un ARNr dans le vivant.  [...] Mais on peut envisager (science-fiction diront certains) l'émergence d'une catégorie nouvelle de réplicateurs, quelque chose comme des usines robotisées capables de fabriquer des répliques d'elles-mêmes, c'est à dire de fabriquer tous les composants nécessaires à partir de matériaux de l'environnement, et de les assembler pour en faire une usine identique.  [...]

Draco : un traitement révolutionnaire contre tous les virus

Des chercheurs du très célèbre Massachussets Institute of Technology (MIT) viennent de mettre au point un traitement à spectre large, capable de neutraliser un grand nombre de virus. Une unique solution pour tous les maux, c'est une petite révolution dans le monde de la médecine.   [...] La plupart des virus ont un génome formé d'ARN simple brin ou d'ARN double brin. Lorsqu'ils attaquent une cellule, leur génome est répliqué grâce aux outils enzymatiques de la cellule colonisée. Pendant cette étape, de l'ARN double brin est formé.  [...]

débrifing sur l'ADN.

Pourquoi l ADN mitochondrial arrive à se répliquer indépendamment du cycle cellulaire, Pourquoi n'est il pas répliqué uniquement au cours de la phase S Il est complètement indépendant de l'ADN nucléaire.  [...] est ce que l'ADN est toujours répliqué avant une division cellulaire Je suppose que oui mais chez les procaryotes c'est le même fonctionnement.  [...]