• Santé - Question, Page, Séparation, Protéine

Sds-page

en général pour une application donnée on ne change pas le ratio acryl/bisacryl, d'ailleurs il se vend maintenant de plus en plus pré-mélangé.   [...] Par contre la concentration totale est le facteur clé qu'on modifie en fonction de la taille des protéines qu'on veut observer, en SDS page en général de ~7% (pour les grosses protéines, 200-400kDa) a 12-14% (pour les petites protéines, 5-15kDa).  [...]

[Biochimie] Modifications post traductionnelles et électrophorèse !

Non pas à ma connaissance. Pour mes protéines après migration à 80V dans le stacking et 130V dans le separating, je transfère en liquide pendant 1h30 à intensité fixe 350 mA, puis les autres étapes sont inchangées par rapport à d'autres westerns sur d'autres protéines.  [...] Oui mais ça reste toujours une question de taille et non de masse, la masse découlant de la taille de la protéine. Le critère permettant la séparation des protéines est la taille, plus exactement comme disent les biophysiciens le volume hydrodynamique de la protéine qui va déterminer sa vitesse de migration au travers des mailles du gel.  [...]

[Biologie Moléculaire] Immunoprécipitation

J'ai une question concernant l'électrophorèse et l'immunoprécipitation. Pendant mon stage j'ai effectué d'abord une lyse cellulaire ensuite une séparation des protéines par électrophorèse et puis un western blot pour identifier la protéine recherchée. Une autre fois, pour la même protéine, j'ai fait l'immunoprécipitation puis le reste jusqu'au western blot.  [...] Alors ma question c'est, pourquoi on fait l'immunoprécipitation qui est une méthode beaucoup plus longue et où on peut avoir des interférences avec des chaînes légères (peut être parce que seule protéines est pr ésente sur la membrane) et peut être aussi parce que avec une électrophorèse sur les protéines totales il peut y avoir des interactions aspécifiques protéine-anticorps.  [...]

problèmes gels SDS PAGE

J'ai actuellement un petit problème avec mes gels SDS PAGE, ils sont très moches même le marqueur moléculaire. on ne voit rien surtout au niveau des PM élevés là où je devrai voir ma protéine. Est-ce que quelqu'un peut me donner un protocole détaillé. gel de concentration à environ 3,5%, gel de séparation à 8%, traitement des échantillons... ou bien me diriger vers un lien.  [...] Si ton problème est uniquement pour le shauts poids moléculaires, peut-être peux tu essayer un 6%. Mais si tu as déjà vu ta bande avec un 8% alors c'est un autre problème. Si tu as fait plusieurs gels et que ça n'a pas fonctionné, mon conseil (ca m'est arrivé un certain nombre de fois ).   [...]

[Biologie Moléculaire] Page sds

Voilà je voudrais savoir quel est le voltage adéquat pour séparer de protéines de 280 et 290 kDa, sachant que jusqu'à maintenant je n'ai pas pu le faire en utilisant des gel de 4-12% et 3-8% à 200V. Je sais qu'avec un SDS-PAGE la charge des protéines n'a pas de roles sur mobilité mais le voltage peut-il jouer un rôle sur la résolution de la séparation.  [...] Je profite de ce topic autour du page-sds pour vous demander un éclairage de ma lanterne s'il vous plaît. Nous avons évoqué cette technique de séparation des protéines selon leur masse dans le cadre de mon master 2, mais les protéines étant de composition en acides aminés différente, avec ce que ces derniers peuvent avoir de fonctions acides ou basiques différentes, je n'arrive pas à comprendre comme la charge globale d'une protéine dénaturée au page sds peut être la même entre deux protéines différentes.  [...]

[Biochimie] technique PAGE non dénaturante

Bonsoir tout le monde, j'aimerais bien connaitre le principe de la technique de séparation des proteines PAGE en condition non dénaturante et quel est la différence entre PAGE et SDS page et utilités.  [...] PAGE en conditions dénaturantes. les protéines sont traitées de façon à les délier et à séparer d'éventuelles sous-unités. On détruit donc leur structure tridimensionnelle. La forme de la protéine n'intervenant plus dans la migration, celle-ci se fait uniquement sur la base de la masse de la molécule. L'interprétation est généralement plus simple.  [...]

[Biochimie] séparation des proteines par Electrofocalisation

je suis en 1er année de medecine, j'aimerai savoir si, quand on parle de séparation des proteines par éléctrofocalisation, on parle seulement de procédés qui mettent en jeux la charge, càd soit la chromatographie d'échange d'ion ou l' electrophorese Bi-dimensionnelle, ou si on parlait aussi de l'electrophorese monodimensionnelle càd sds-page sachant que cette méthode ne joue que sur la taille de la proteine.  [...] Non, le SDS-Page n'a rien a voir avec la charge, puisque par définition on migre en s'affranchissant de la charge des protéines.  [...]

Electrophorèse bidimensionnelle VS unidimensionnelle

L'électrophorèse bidimensionnelle (2D-E) consiste en une séparation des protéines en deux temps. l'isoélectrofocalisation (IEF) sépare les protéines selon leur point isoélectrique (pI) puis une migration en conditions dénaturantes sur gel de polyacrylamide (SDS-PAGE), perpendiculairement à l'IEF, sépare les protéines selon leur masse moléculaire (MW).  [...] Après coloration des protéines séparées, on obtient un gel pouvant contenir plusieurs centaines voire plus d'un millier de spots protéiques. L'ensemble de ces spots représente le profil protéique de l'échantillon étudié (cellules, tissu, etc...). La comparaison de profils protéiques correspondant à des états particuliers, par exemple sain et malade, permet de déceler les protéines liées à ces états.  [...]

protéomique

La technique permet la séparation des protéines et l'obtention de profils très semblable aux profils de gel 2D classique, sauf qu'ici à la place des bandelettes de l'IEF, on utilise un gel 1D (SDS PAGE par exemple), on coupe la bande qui nous intéresse, puis on la fait migré sur un autre gel toujours en 1D.  [...] Il y a plusieurs possibilités. Par exemple on peut déposer des protéines issues de complexes obtenus par EMSA (=gel retard, gel shift). Cela permet de caractériser une interaction protéine-ADN.  [...]

[Biochimie] Sucrose

Es tu sûr de la dénomination N'est ce pas plutôt une séparation sur gradient de sucrose par ultracentifugation, suivie d'une séparation des différentes fractions par SDS-PAGE.  [...] Je pense également que c'est un centrifugation sur gradient de sucrose et après il faut déposer sur gel SDS-PAGE pour voir le contenu des différentes fractions du gradient.  [...]