• Santé - Question, Enzymes, Température, Tampon

[Biologie Moléculaire] les enzymes de restrictions ...

salut a tts le mondes j'ai une question concernant les enzymes de restrictions de type III et I.  [...] Je n'ai pas vraiment compris ta question mais la différence entre ces enzymes est la température et le tampon dans lequel elles agissent. Après je ne sais pas trop si ça répond à ce que tu as demandé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Montrer une phosphorylation de protéine en WB

Merci Edelweiss, en effet je l'ai déjà lu. La question est la même que la mienne. Je ne peux pas utiliser un anticorps anti-phospho dans la mesure ou je ne sais pas si c'est une phosphorylation.  [...] Oui c'est ce qu'on m'a dit. Il faut maintenant que je trouve ces enzymes. Tu as une idée du protocole (temps d'incubation, tampon, température, etc.).  [...]

Extraction enzymes

j'ai fait une extraction des enzymes à l'aide de tampon Tris-maléate contenant Triton X100,mais je ne sais pas à quelle température je peux conserver mes extraits.  [...] Je te suggère de les conserver à -20°C. Généralement on conserve les enzymes très concentrées en solution, à -20°C.  [...]

pH du sang

Bonjour j'aimerais que quelqu'un m'aide à réfléchir. voici la question. D'après vous lesang in-vivo possèderait-il une capacité tampon plus grande que dans une solution et pourquoi. D'apres moi oui du à la température du corps. merci.  [...] Ainsi je vois pas en quoi la température pourrai changer ce pouvoir tampon, étant donné que la force des acides et bases ainsi que le force na varie pas avec la température.  [...]

[Biologie Moléculaire] Ligation

Quelques petites questions. Tu as déja réussi des clonages avec ces enzymes de restriction, avec cette ligase, dans les même conditions Il y a des problèmes de clonage également autour de toi Quand tu purifies tes bandes sur gel, tu dois faire ça sous une lampe UV.  [...] Pour le clonage 2. SmaI oui je l'utilise à température ambiante (soit 25°C à peu près) et seulement après je rajoute l'autre enzyme à 37°C.  [...]

[Génétique] hybridation adn/adn : technique de southern blot

j'ai réalisé récemment une hybridation adn/adn par la technique de Southern blot. Lors de la digestion enzymatique, il à été utilisé de l'ADN provenant de phage lambda. Les différents tubes comportaient également de l'eau stérile, du tampon 10X, Ainsi que les enzymes de restriction, (EcoRI et/ou HindIII selon le tube).  [...] Par contre je n'ai pas bien compris le rôle du tampon 10x. S'agit-il bien d'un tampon permettant l'activation de l'enzyme en question Dans ce cas, une quantité insuffisante de ce tampon expliquerait - il une digestion incomplète de l'enzyme, d'où le fait que j'obtienne des fragments trop gros restant coincés en haut du gel comme tu l'as dit.  [...]

[Biologie Moléculaire] Protocole digestion

Une question. quelle quantité d'ADN plasmidique devrais-je mettre Mon plasmide a une concentration de 150 ng/ul, j'ai fait mon calcul pour le nombre d'unités d'enzyme pour 1 ug d'ADN plasmidique. Est-ce une quantité cohérente (mon clonage ultérieur sera un peu ch****).  [...] derniere chose, n'oublie pas qu'il ne faut pas depasser 10% de ton volume total en enzyme de restriction. Sinon le glycerol qu'elles contiennent fini par totalement perturbé ta digestion (inhibition, activité star etc...).  [...]

[Biochimie] Utilisation du bain marie dans le dosage des enzymes

Je suppose que l'utilisation du bain mari c'est pour donner une température adéquate à la réaction lors de sa provocation dans la cuve du spectrophotomètre. Mais là je pense ceci. le tampon et la substance distinée à régire avec l'enzyme sont conservés à une température de 26C°, Ok MAIS l'homogénat et sur la glace 4C° et au moment du mélange dans la cuve 4C° et 26C° je ne sais pas ce que ça va donner.  [...] Très bien vu mais il est probable que le volume de votre échantillon (homogénat) soit très inférieure à celui du tampon (et de la cuve, qui est à température ambiante.)si bien que l'échange thermique entre les deux va égaliser les températures des deux autour de 26°C.  [...]

[Génétique] Pcr

je sais que le fonctionnement de la taq polymerase nécessite la présence de ces tampon, si j'ai posé cette question c'est parce que ma chargé de TD a l'habitude de nous dire pourquoi on utilise ces tampon et elle ne se contente pas d'une telle réponse alors je croyais que vous pouviez me donner une explication plus approfondie et ceci nécessité pas une telle agressivité en disant franchement ce genre de question.  [...] Vous demandez à quoi sert le tampon, je vous réponds de manière aussi brutale qu'est posée votre question que c'est le tampon de l'enzyme. Et le mieux c'est que c'est la réponse à votre question.  [...]

[Biologie Moléculaire] Enzymes de restriction sur plasmides- Digestion complète et incomplète

La digestion incomplète est une digestion qui n'est pas efficace sur l'ensemble des molécules du substrat. Exemple. la moitié des plasmides sont digérés, l'autre moitié est intécte. Elle se produit quand l'enzyme n'est pas bien dosée, qu'elle n'est pas très active, que la température ou le tampon ne sont pas bien ajustés,  [...] aussi je cherche a savoir comment trouver la taille du vecteur pSK (environ 2900 pb) abres la double digestion par ces deux mêmes enzymes.  [...]