• Santé - Question, ADN, Restriction

[Génétique] Thérapie génique: synthétiser le gène correcteur

Et ensuite il y a l'étape de l'insertion du fragment d'ADN, clivé par l'enzyme de restriction qui sera inséré dans un plasmide ou un vecteur.  [...] Merci beaucoup. J'ai une autre question. Comment fait-on pour insérer le fragment d'adn obtenu par les enzymes de restriction dans le vecteur.  [...]

[Biochimie] Mecanisme de ligation SOS clonage

Ma question du jour, c'est de savoir le mecanisme d'action d'une ADN ligase en général et dans mon cas pour le clonage d'un géne d'interet dans un plasmide (PICZ) qui sont les deux digérés par les mémes enzymes de restriction (SFII et NOTI).  [...] - Traitement du plasmide receveur avec les enzymes de restrictions, puis traitement à la phosphatase alcaline (aussi cela évitera que le plasmide se recircularise quand vous rajouterez la ligase et l'ATP.) et purification.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr

Je ne comprend pas bien ta question. Pour construire un plasmide recombiannt tu as besoin de ta séquence d'intêret c'est à dire celle que tu veux intégrer dans le plasmide. Tu l'obtiens en l'amplifiant par PCR ou en digerant directement ton ADN par une enzyme de restriction.  [...] Ton fragement d'intêret peut possèder plusieurs sites de restriction spécifiques à l'enzyme utilisée. on obtient alors plusieurs fragments d'ADN dont un seul comprend le gène d'intéret. L'ADN plasmidique ne doit contenir qu'un seul site de restriction spécifique, au sein d'un gène de sélection.  [...]

plasmide-clonage

aprés avoir rendu les bactéries compétantes et les avoir coupé avec des enzymes de restriction, on peut faire rentrer la molécule d'adn dans les bactéries, ensuite il faut repérer les bactéries ayant reçu ce géne.  [...] En général (hors système Bleu-blanc de la B-Gal), on extrait l'ADN des colonies ayant poussé (miniprep. on pique une colonie, on la fait pousser en culture une nuit dans un milieu liquide contenant l'antibiotique en question, puis on la casse et on purifie son ADN) et on coupe l'ADN avec des enzymes de restriction pour déterminer quelle colonie possède le fragment d'intérêt (on dit alors que la colonie est un clone positif ) et l'ADN de cette colonie est alors amplifié par Midipreps pour être utilisé.  [...]

[Génétique] taille moyenne fragments de restriction

Je bloque sur une question où l'on me demande de calculer la taille moyenne des fragments de restriction après digestion par ecoR1 (site reconnaissance. GAATTC) de l'adn humain.  [...] Après ça il ne te reste plus qu'a multiplier la fréquence d'apparition de GAATTC par le nombre de paire de bases dans le génome humain pour avoir le nombre de sites théoriques EcoRI dans notre génome. Et vu que tu désires avoir la taille moyenne des fragments, tu n'as plus qu'a diviser la taille du génome par le nombre de séquences EcoRI.   [...]

Enzymes de restriction

La méthylation de certaines bases, chez les bactéries, permet, si j'ai bien compris, d'éviter à l'ADN d'être découpé. Et donc pour éviter que son ADN soit découpé, la bactérie méthyle les bases qui correspondent à son (ses) enzymes de restriction... C'est cela.  [...] une petite question sur les enzymes de restriction. elles protègent les bactéries des phages donc elles coupent l'ADN simple et double brin mais sont elles capables de couper l'ARN.  [...]

sonde et enzyme de restriction

Bonjour tout le monde, j'ai une petite question en génétique, alors si j'ai une sonde qui va s'hybrider avec un fragement d'adn, et il y a une enzyme de restriction qui va couper au beau milieu du fragment, du coup la partie qui était supposée s'hybrider avec la sonde, devient coupée en deux, est ce que la sonde, va s'hybrider avec une des deux petits bouts crées autrement dit si je fais une éléctrophorese j'aurai une seule bande ou bien 2.  [...] La question de départ ne mentionne que l electrophorèse et ce que l'on voit sur le gel, donc on ne doit pas faire intervenir la sonde dans l'explication du fait que l'on voit tel ou tel nombre de bandes, non.  [...]

[Biologie Cellulaire] enzyme de restriction

On prélève l'insert (le gène à cloner) grace a une enzyme de restriction qui va cliver l'ADN sur des sites de restriction spécifique (c'est une séquence palindromique). On peut ensuite amplifier l'insert par PCR. puis l'insérer dans le polylinker avec une ligase.  [...] ce n'est pas qu'une question de quantité... mais imagine ce que tu vas avoir si tu coupes ton ADNg par une enzyme de restriction genre EcoRI.  [...]

[Génétique] Dm sur la myopathie de Duchenne

Pour la question 2. tu dois d'abord savoir ce qu'est une enzyme de restriction (une enzyme qui coupe l'ADN, en reconnaissant une séquence particulière de désoxynucléotides). Les 2 allèles, sain et muté, ont-ils exactement la même séquence.  [...] 2) les bandes ne sont pas le chromosome X mais un fragment du gène considéré. Les 2 allèles ont des séquences différentes, donc les enzymes de restriction coupent en des endroits différents, donc les fragments obtenus n'ont pas la même taille.  [...]

[Biochimie] Petite interrogation sur les enzymes de restrictions

Excuse moi si je n'est pas utilisé le bon terme, j'ai écris ce message un peu rapidement, c'est vrai que c'est LA PCR et, vous avez raison, il n'y a pas d'enzyme de restriction mais ce sont les enzymes polymérase dont je parlais (ou TAQ polymérase). Voilà après cette correction pouvez vous répondre à ma question pr écedemment posé.  [...] Vous etes sur qu'il ne s'agit pas d'enzymes de restriction Ca collerait plus a l'interrogation initiale de Valentino6 puisque en effet, la police peut étudier l'ADN en analysant les polymorphisme de restriction (RFLP) qui justement peut faire invervenir un grand nombre d'enzymes différentes.  [...]