• Santé - Quantité, Radioactivité, Protéines

[Divers] Comment déterminer l'activité d'une kinase en pratique.?

Sinon si tu connais le nombre de molécules de substrat mis dans le tube en presence de kinase, que tu connais la quantité de kinase mise et que l'ATP radioactif n'est pas limitant, alors en déterminant la quantité de radioactivité incorporée dans les proteines tu dois pouvoir en deduire une activité spécifique.  [...] Pour quantifier la radioactivité incorporée dans les proteines, tout d'abord tu précipites les proteines a partir du mélange reactionnel, histoire de te debarasser de la radioactivité non incorporée.  [...]

Chrome 51 et globules rouges

La demie vie d'un globule rouge est de 28jours. Donc pour voir si le malade est atteint d'hémolyse, on prélève des globules rouges que l'on incube avec la radioactivité, on réinjecte une quantité de globules dont on connait la quantité de radioactivité, ensuite on prélève au cours du temps régulierement et on compte la radioactivité.  [...] La dmie vie correspond sera atteinte lorsque la quantité de radioactivité aura diminuée de motié pour un nbre donné de globules rouges. Si elle est inférieure à 28 jours c'est qu'il a hémolyse exagérée.  [...]

Lecture graphique éléctrophorèse

Selon moi l'axe des ordonnées qui donne la radioactivité permet aussi d'avoir le nombre de protéines synthétisé étant donné qu'elles réagissent (donc elles sont présentes). Or si on regarde la flèche 43, on voit sur les 2 graphiques que la partie de gauche est plus élevé que celle de droite, donc leur nombre est plus élevé.  [...] C'est sur que si dit comme ça ça semble plus simple Mais est ce qu'on ne peut pas dire qu'il y ai plus de proteine à gauche qu'à droite, étant donné qu'à gauche de 43 la courbe est bien plus élevé Pour moi plus la courbe est élevé plus la radioactivité est importante, donc plus les proteines existantes s'expriment, donc logiquement les proteines sont plus nombreuses dans les bandes de gauche que de droite je ne sais pas si j'arrive à bien exprimer ma pensée, mais en résumé à droite peu de radioactivité = peu d'expression = proteine moins nombreuses, non.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transfection siRNA et plasmide

Je suis doctorant en biochimie dans le domaine de la cancérologie et j'étudie l'influence d'une protéine de choc thermique (HSP) sur l'expression d'un facteur de transcription (TF).  [...] Par contre, vous supposez que HSP régule l'expression du TF au niveau post-traductionnel, bien entendu Dans ce cas là, pourquoi ne faites vous pas un marquage à la méthionine S35 puis immunoprécipitation anti-TF et regarder à plusieurs temps la quantité de radioactivité par autoradiographie Ainsi vous avez accès à la demi-vie de votre protéine, modulée ou pas par HSP, et dans ce cas, que la demi-vie soit courte ou pas, vous saurez forcément comment évolue l'expression de la protéine (au niveau post-traductionnel).  [...]

[Biochimie] Autoradiographie et binding

Le binding est surtout utilisé pour définir les constantes de liaison à l'équilibre d'un ligand à son récepteur. J'ai une petite idée de cette technique sans pour autant être sûr de ce que j'avance. des quantités croissantes de radioligand ont été mises en présence du récepteur.  [...] Après dépôt sur gel, migration életrophorétique, on soumet le gel à une autoradiographie. On obtient dans les pistes une quantité croissante de radioactivité et saturation à forte concentration. En quantifiant la radioactivité de chaque piste on peut donc en déduire une courbe d'intensité relative de radioactivité en fonction de la concentration en radioligand, et de là en déduire le Kd.  [...]

[Biologie Moléculaire] Stabilité substrat d'ADN pour test helicase

est ce que diminuer la quantite de radioactivite pourrait changer quelque chose.  [...] Pour l'elution,d'habitude on elue dans du TEN (tris, edta, Nacl) c'est ce que j'ai fais au debut et pour la deuxieme fois j'ai augmente la conc en Nacl et rajouté du MgCl2 qui en effet maintenant que tu me le dis peut paraitre idiot mais c'est parcequ'on avait deja observe que celui ci stabilisait des substrats tel que des jonctions de holidays.   [...]

Matériels et méthodes | Dossier

Pour être utilisée dans l'étude de liaison ou dans la mesure d'activité, il est nécessaire de quantifier la protéine kinase C, ceci est fait par un dosage de Lowry. Pour cela, une gamme étalon est réalisée en utilisant une solution de sérum albumine comme source de protéines, chaque tube de cette gamme et chaque tube échantillon à doser faisant 0,5 ml.  [...] La radioactivité est mesurée sur le filtrat et par corrélation donne la quantité d' ester de phorbol toujours présente après les lavages.  [...]

[Biologie Moléculaire] Expérience d'Hershey et Chase

et d'autre part une deuxieme explication avec le même protocole mais dont le résultat permettant de conclure que l'ADN est support de l'information est que la radioactivité est persistante chez les progénitures du phage à l'ADN marqué et disparait chez les progenitures du phage aux protéines marquées.  [...] La culture 2 ne devient pas radioactive puisque la radioactivité reste au niveau des phages donc le soufre, et toujours par extrapolation les protéines du phage, ne sont pas passées du phage à la bactérie.  [...]

[Biologie Moléculaire] structure des protéines

Donc le pic de radioactivité représente les protéines synthétisées à partir des aa radioactifs et des ARNm issus du pancréas. Et d'après le fichier joint, ce pic se situe à peu près au même niveau que la proinsuline sur le gel, ce qui signifie que les protéines immunoprécipitées sont de la proinsuline.  [...] 3/ Comparez la position sur le gel du pic de radioactivité à la position de la proinsuline. Qu'en déduisez vous Reliez cette observation à ce que vous savez de la voix de la biosynthèse des protéines secrétées.  [...]

remplacer le P32...

Je cherche comment remplacer l'isotope P32 pour mes etudes sur la phosphorylation de proteines... En fait je voudrais eviter de manipuler la radioactivite.  [...] - Utiliser un anticrorps qui ne reconnaît que la forme phosphorylée à un site donnée de la protéine. (pas fréquent mais très utile).  [...]