• Santé - Quantité, Qualité, ARN

[Biochimie] Améliorer la quantité, qualité et pureté d'une extraction d'ARN

D'autre part, j'ai mesuré la qualité de l'extraction en mesurant le ration 28S/18S pour chaque méthode utilisé. Pour l'échantillon de précipitation le ratio est 1,39. Pour l'échantillon colonne le ratio est de 1,28. Je remarque qu'il y aune plus grande dégradation dans les échantillons où la méthode par colonne a été fait contrairement aux échantillons fait par la méthode par précipitation.  [...] Le début de l'extraction est très important. conditions d'homogénéisation (mécanique, chimique), il faut se mettre à froid, ainsi que la quantité de matériel (trop est pire que pas assez.). Comment avez vous procédé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ARN

Ca coute un peu cher mais les kits d'extraction spécialement concus pour petite quantité d'arn sont la meilleure solution dans ton cas à mon avis.  [...] Avant j'extrayais l'ARN sur tisssus et pour lyser, j'utilisais le phénol -choroforme, quand je suis repassé sur cellules, j'ai testé le phénol-choroforme/kit RNeasy vs kit RNeasy, j'avais + en quantité et l'arn de meilleure qualité, du coup je suis resté avec ce protocole.  [...]

[Biologie Moléculaire] Que devient l'ARNr dans une reaction de RT

Voila, nous avons effectué ensemble une extraction d'ARN total (à partir d'embryon de zebrafish) en utilisant un Kit (avectraitement à la DNAse). Pour vérifier la qualité des nos ARN nous en déposons 1µl sur une puce ARN Nano bioanalyser agilent. Nous y avons vu nos deux beaux pics d'ARNr 18 et 28S avec un RIN de 10.  [...] Je fais de la Q-PCR donc c'est vraiment important pour moi de vérifier la qualité de mes ARN. L'avantage c'est qu'on peut déterminer la quantité et l'intégrité de nos ARN en une seule manipe grâce au fameux RIN. Voici un lien d'une publi sur l'importance de l'intégrité de l'ARN.  [...]

Uracile

L'organisme privilégierait la quantité à la qualité pour l'ARN puisque ce n'est qu'un messager transitoire tandis que l'ADN doit être plus stable puisque il est responsable de la conservation de l'information.  [...] Cela dit je me demande si il ne serait pas interessant de se demander pourquoi pas d'uracile dans l'ADN Peut être une question de stabilité de l'hélice. Le CH3 supplémentaire apporte peut être quelque chose.   [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction de l'ARN+ RT-PCR

Je suis nouvelle dans le domaine de la biologie moléculaire. Je vais faire l'extraction de l'ARN à partir des biopsies et des cellules pour faire par la suite une RT-PCR. Je n'arrive pas a choisir le Kit d'extraction d'ARN et de la RT-PCR. En se basant sur votre expérience pouvez vous me recommender les kit qui me permettent d'extraire mon ARN (en bonne qualité) et pour faire ensuite RT-PCR.  [...] Je connais quelqu'un qui utilisait le kit de MP (ex-Qbiogen) Pro RNA avec la machine FastPrep, réputée pour sa grande efficacité dans la lyse des tissus les plus robustes, pour obtenir des ARN de cellules de poumons et autres tissus humains. Les ARN obtenus sont de bonne qualité (Confirmé par analyse Agilent) et en bonne concentration, les protocoles rapides (moins qu'une colonne par contre) et on peut faire des analyses transcriptionelles précises derrières.  [...]

[Biochimie] rapport 28S/18S

Je suis probablement complétement à coté de la case mais quand je vois 28S et 18S je vois des sous unité ribosomique. Peux tu nous donner le contexte.   [...] On peut parler de rapport molaire entre 28s et 18s qui doit être identique. Pour juger de la qualité d'une préparation d'ARN on peut analyser le rapport de quantité 28s/18s qui doit être de 2.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN

Ce qui peut limiter l'extraction c'est. la quantité de matériel de départ, la qualité de la lyse cellulaire, la concentration relative en ARN.  [...] sinon faire un mélange avec methanol-chloroforme (récupérer la phase supérieur) suivi d'un mélange chloroforme (récuperer la phase supérieur) suivi d'une précipitation à l'acetate de sodium et ethanol (0.3M finaux d'acetate de Na, avec 2.5V de ethanol 99%, une heure a -20°, centrifuger récupérer le culot et le laver avec 250 microlitres ethanol 70%, centrifuger evacuer l'ethanol et resuspendre en eau-DEPC ) permet normalement d'avoir une bonne qualité d'ARN sans trop de pertes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Rt-pcr

Je fais de la RT-PCR sur des d'ARN extraits à partir de poumons. Je réalise une extraction au trizol puis sur colonne d'affinité pour purifier mes ARN. Pas de contaminations protéiques, et des ARN de qualité. je réalise ensuite une DNAse avant RT-PCR sur 250ng d'ARN.  [...] ça peut venir de tes amorces si tu n'as pas d'amplification avec d'autres échantillons de bonne qualité, elles ne sont peut-être pas spécifiques de ton 28S.  [...]

[Biologie Moléculaire] Nettoyage d'ARNs & Transfert de protéines

Je me doute que la qualité de l'ARN ne change pas que tu récupère ou non les protéines avec le Rneasy kit Qiagen puisque'à la base c'est un kit optimiser pour extraire l'ARN. Je parlais d'autres kits. Moi je n'extrait pas mon ARN le jour du prélèvement, je le congèle après l'avoir mis dans du RNA later c'est pour cela que je ne peux pas récupérer les protéines par la suite. Ce n'est pas compatible.  [...] Mais là, même en disséquant avant congélation je perd en qualité même si je suis rapide. Mais ce n'est pas grave même avec un ARN de qualité correcte et non pas axcellente, on arrive à faire une PCR.  [...]

Baisse de la fertilité masculine : le tabagisme de la mère responsable ?

Depuis une trentaine d'années, différentes études montrent que la fertilité des hommes est en berne. La quantité et la qualité du sperme baissent, et les Français ne font pas figure d'exception. En décembre dernier, une étude menée à l'échelle nationale et visant une grande représentativité démontrait qu'entre 1989 et 2005, le nombre moyen de spermatozoïdes avait diminué d'un tiers.  [...] De nombreuses études signalent une baisse de la quantité et de la qualité du sperme des hommes depuis les dernières décennies. Plusieurs facteurs environnementaux seraient en cause, parmi lesquels le tabagisme de la femme enceinte. Andrology University of Utah, Microscopy Lab, Nasa.  [...]