• Santé - Quantité, Protéines, Puits

Techniques utilisées en lab de biomol - Page 2

En fait, j'ai jamais bien compris l'utilité de cette expérience (Coomassie). Quand il manque des bandes dans certains puits, c'est nickel. Mais souvent on n'est pas très sur qu'elles manquent vraiment... Ou alors on n'est pas sur d'avoir la même quantité de protéines dans tous les puits.  [...] C'était pour détecter d'éventuelles différences dans les protéines du cerveau entre des souris mutante et WT. Effectivement, on a bien observé toute une région où les bandes étaient plus claires voire absentes (= une famille d'isoformes absents, finalement).  [...]

[Biologie Moléculaire] Dosage protéine

Je travaille sur des BL21 GFP et j'extraie les protéines totales par une simple lyse des bactéries dans deux situations. non induites et induites à l'IPTG. Avant de faire migrer sur polyacrylamide, j'aimerais doser mes protéines pour déposer la même quantité dans tous les puits.  [...] J'ai un nanodrop, mais la mesure à 280nm est polluer par la présence d'ADN dans mon échantillon. Je pensais faire une coloration des prot avec le kit BCA mais la lecture se fait à 562nm, or la GFP emet à 504nm. Si elle est colorée ca change peut-être la donne mais je ne sait pas trop.   [...]

[Biochimie] SDS page

Pour le marqueur je n'est pas déposer, mais j'ai utiliser d'autre protéines d'autres collègues et qui ont montrer des bandes sur le gel.  [...] J'ai essayer de déposer différentes quantité de protéines dans les puits.  [...]

[Biologie Moléculaire] Migration SDS page en "sourire"

si tu as des puits en rab de chaque coté, dépose du tampon sans protéines (genre laemmli dilué comme si il y avait des protéines) dans chacun des puits libres de chaque coté. Idéalement, il faut centrer les dépots et combler les puits vides de chaque coté.  [...] 2) Si on laisse des puits inoccupés par un échantillon, les protéines des puits adjacents peuvent mal migrer, c''est ce qu'on appelle 'l'effet de bordure. Ce problème est facilement réglé en mettant simplement du tampon d'échantillon (1 X) dans ces puits inutilisés.  [...]

[Biochimie] Comment lire et interpréter un Immunoblot ?

La différence d'exposition permet de voir si de nouvelles bandes apparaissent. Par exemple, tu peux voir sur le temps d'exposition long des bandes qui sont invisibles sur le temps d'exposition court (car la quantité de protéines correspondant a cette bande est faible, voir figure 4 gel E).  [...] L'actine est, bien entendu, une protéine ubiquitaire dont on estime que les différents traitements appliqués aux cellules ne vont pas modifier la concentration. Ainsi, on s'en sert pour certifier que l'on a bien déposer la même quantité globale de protéine dans les deux puits (contrôle et expérimental).  [...]

[Biologie Moléculaire] Immunohistochimie/ Immunomarquage

Tu déposes ensuite une certaine quantité de ton extrait dans chaque puits, en veillant à faire des dilutions de puits en puits. Je ne vais pas commencer à te dire le temps de repos entre les étapes. Tu auras bien sur des rinçages à faire durant la manip.  [...] Donc la proteine reconnu ne peut être qu'un antigene non Parce que dans les (quelques) recherches que j'ai fait sur l'immunohistochimie on parle de detection de proteines sans préciser le type.  [...]

[Biotechnologie] Culture bactérienne et protéines recombinantes en plaque 96 puits

Mon problème est le suivant, si je fais des test d'expression en format plaque 96 puits, comment séparer la fraction soluble et insoluble après la lyse bactérienne...car je ne possède pas de centri/rotor permettant de faire tourne une plaque 96 puits à une telle vitesse (15000g).  [...] Quant aux plaques de filtration, tu vas peut être rire, mais je n'ai pas accès à la publication que tu me mets via le lien...(je n'ai pas de compte pubmed)...est ce que tu pourrais me donner la référence si possible de ces plaques de filtration qui apparaissent dans cette publi.  [...]

[Biologie Moléculaire] Sds-page

C'est la réponse à ton exam les trois propositions là La 1 c'est pas possible vu que les protéines dans les puits 2 et 3 n'ont pas la même taille (à moins que c'était la même protéine qui c'est pas fixée et qui a été clivée après mais j'en doute). Les 2 et 3 ok même si c'est la 2 la plus plausible si la bande est vraiment intense.  [...] Et les protéines de différentes tailles dans le puits 2 ça doit être tout simplement des protéines cellulaires qui ne se sont pas fixées et qui sont virées avec le PBS.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR en temps réel (qPCR)

selon le principe théorique de la PCR, la quantité d'ADN double à chaque cycle. Autrement dit, si entre 2 puits il y a une différence de Ct d'un cycle, on peut supposer qu'il y a 2X plus d'ADN dans un des puits.  [...] Je vous remercie d'abord pour vos réponses, cependant, j'aimerais bien signaler que la courbe de fluorescence est exponentielle, donc la quantité d'ADNc augmente via une equation expionentielle, jusqu'à ce que les sites d'action des polymérase soient tous saturés, on passe alors à la partie linéaire de la courbe.  [...]

adn et arn

- la quantité d'ADN ou d'ARN qu'il y a dans ton puits.  [...] - le coefficient reliant les deux (1 Unité d'absorbance = x g d'ADN/l).   [...]