• Santé - Quantité, Protéine, Gamme

[Biochimie] Calcul de quantité de proteine

Voilà j'ai un doute concernant un calcul. En faite je fais une gamme de proteine qui me permet de calculer les proteines totales presentes dans mes essais. Cette gamme est en mg/mL. Ensuite je fais une autre manip qui me permet de connaitre la quantité d'une proteine specifique.  [...] La gamme de cette proteine specifique est en ng/mL. Or au final je veux une quantité en ng de cette proteine par mg de proteine totale. Dc je divise ma quantité en ng de proteine specifique par ma quantité en mg de prot totale. Est ce que le raisonnement est bon.  [...]

[Biochimie] Protocole de purification d'une protéine, vos avis

Ce serait bien de décrire comment est mesurée l'activité, ainsi que la méthode de dosage de protéine. Et il faudrait mesurer l'activité et la quantité en protéine à chaque étape, avant le sulfate d'ammonium, après.  [...] Je ne connais pas ma quantité de protéine dois-je réaliser une gamme étalon pour déterminer les quantité de protéines de mes solutions.  [...]

[Biochimie] Quantifier un western blot

Il existe des appareils spécialisé (genre chemigenius), qui permette d'acquérir des images jusqu'à 65 000 niveaux de gris, couplé au logiciel genetool pour faire une analyse automatique (identification des pistes et des bandes, determination de la taille/poids moléculaire par rapport à une marqueur, détermination de la quantité par rapport à une gamme standard).  [...] le film a une gamme de réponse linéaire, le substrat aussi, la quantité d'anticorps joue aussi un rôle. C'est pour cela que l'idéal est d'avoir une gamme de quantité sur le même gel, et sur la même expo de la même protéine, pour t'assurer que tes conditions sont bien quantitatives.  [...]

[Biochimie] Test eliza

pour la dilution, c'est pour faire une gamme et avoir une corrélation entre l'absorbance obtenue et la quantité de protéine. C'est une référence qui permet de déduire la concentration dans les échantillons inconnus à partir de leur absorbance.  [...] je pense que pour la première étape où on a mélange le SAB et le PBS et incuber pour 50 min était pour bien fixé l'antigene qui est le SAB au fond du puit... le PBS va etre un bloquant dans (il va aider le SAB à se fixer sur le fond de la plaque de microtitration )... vous en dites quoi.  [...]

[Biochimie] dot plot et overlay

Si tu es riche en matériel, tu peux commencer par faire des tests par toi même, par exemple en faisant une gamme de quantité a déposer, puis une gamme de concentration de ta solution de protéine, sans oublier les contrôles adéquats.  [...] En faite, comme j'en ai que peu des deux protéines je suis obligée de commencer par le dot plot et l'overlay pour voir les interactions possibles et par la suite je passerai a l'IP. J'ignore la quantité exacte de protéines que je dois déposer.  [...]

[Biologie Moléculaire] western blot "semi-quantitatif", pourquoi??

Elle serait quantitative si vous déposiez une gamme de concentration de la protéine que vous souhaitez quantifier. En général ce que l'on fait c'est que l'on utilise une protéine standard (l'actine) et on dilue les échantillons pour avoir la même quantité dans tous les puits.  [...] Il est possible en western blot d'observer des variations de quantité de protéines, mais il faut être prudent pour éviter les biais méthodologiques. par exemple quand j'en faisais, j'utilisais comme référence la quantification d'un de mes échantillons, le même tout au long de la manip, je déposais chaque échantillon en double avec 2 concentrations différentes (ce qui me permettait de vérifier la proportionnalité entre mes 2 dépôts.  [...]

calcul de concentration

une courbe-étalon c'est l'absorbance en fonction de la concentration. Donc tu mesures l'absorbance de ta solution de protéine et tu détermines la concentration en reportant ta valeur sur la courbe-étalon. Donc tu la détermines graphiquement. Mais attention de faire ta mesure d'absorbance à la même longueur d'onde que ta courbe-étalon a été déterminée.  [...] Avec l'équation de la droite de régression, tu peux touver la quantité de protéine dans ta prise d'essai (5 ou 10µL) et donc ta concentration.  [...]

[Biochimie] Dosage des protéines totales méthode de Bradford.

Tu lit l'absorbance de ta gamme étalon et trace ta courbe tu auras un courbe de l'absorbance en fonction de la quantité de protéine présente dans tes tubes.  [...] Dans les deux cas quand tu testeras ton tube contenant ta protéine et le colorant, tu va obtenir une DO que tu repporte sur le graphe que tu a tracer manuellement ou c'est le spectro qui le fait automatiquement.  [...]

[Biochimie] [TP Séparation de molécules par chromatographie d'exclusion sur colonne] Niveau L1S1

On a ensuite dû prélever 20micro litres des fractions 1 à 11 (la dernière contenant les dernières molécules de cytochrome c) et d'y rajouter 1mL de bleu de Coomassie permettant de mettre en évidence la présence des protéines. Avec la gamme étalon du BSA, on a pu obtenir la quantité de protéine pour ces fractions, en micro g.  [...] Du coup je dois trouver la quantité de matière (en mol) initiale c'est ça Parce que pour trouver la quantité de protéines dans 1mg de cytochrome c.  [...]

[Biochimie] Au secours!

I - Une gamme étalon est réalisée à partir de sérumalbumine bovine (SAB), une protéine que l'on peut purifier en grande quantité à partir de sérum de boeuf, et qui est utilisée de ce fait comme protéine de référence. On admet par conséquent qu'un échantillon protéique d'origine biologique quelconque, d'absorbance A, a la même concentration en protéines qu'un échantillon de SAB traité dans les mêmes conditions et ayant la même absorbance A.  [...] La solution mère de SAB a pour concentration initiale C0 = 1 mg.mL-1*. une fraction aliquote de cette solution est diluée au 1/10è pour réaliser la gamme étalon sur la base des concentrations suivantes. 25 / 50 / 75 / et 100 µg.mL-1. Après addition du réactif de Bradford, les absorbances suivantes sont obtenues.  [...]