• Santé - Quantité, Protéine, Anticorps

[Génétique] Relation mutation phénotype

- Si la protéine est capable de réagir avec l'anticorps (oups. j'ai oublié de dire qu'on peut localiser la protéine grace à un anticorps).  [...] mutation ponctuelle dans séquence régulatrice 5' -. + ou - d'ARNm donc + ou - de quantité de protéine. La protéine est présente et fonctionnelle. Elle est capable de réagir avec l'anticorps.  [...]

[Biochimie] gros loading de protéine pour un western blot

Je fais pas mal de Western blot et mon prof est convaincu qu'il faut des loadings de 60ug de protéine pour avoir une chance de marquer les quelques protéines (Hif1a, VHL...) qu'ont veut (avec des anticorps pour lesquels nous n'avons toujours pas de ctrl positif, soi-dit en passant).  [...] 60µg c'est vraiment beaucoup. L'expérience montre que si l'on charge trop un gel la migration est pourrie et la détection marche mal. C'est ainsi que parfois, quand on y arrive pas il vaut même mieux diminuer la quantité de protéines chargées plutôt que de l'augmenter.  [...]

[Biochimie] Sollution tampon votre avis

Le tanpon que tu souhaites utiliser est un tampon d'extraction donc pour moi le plus important c'est qu'il te permettes d'extraite ta protéine avec un rendement maximal et tout en gardant l'activité de ta protréine. La composition que tu as donné me parait classique.  [...] Ensuite fait une étude comparative entre les deux (SDS-PAGE pour regarder la quantité de ta protéine et southernblot si tu as un anticorps et fait également ton test d'activité avec les deux extractions et regarde si tu vois des différences).  [...]

Western Blot et coomassie

Avec le bleu on a deux informations. la taille et la quantité. Par contre si vous avez un problème technique qui fait que vous produisez une protéine de taille identique a celle attendue mais pas celle attendue, vous ne le saurez jamais.  [...] Le western blot utilise pour révéler la protéine des anticorps spécifiques. On a donc deux (meme trois) informations. la taille, la quantité et la qualité. si vous détectez votre protéine vous êtes sur que c'est bien elle, pas d'usurpation possible. C'est une information de spécificité.  [...]

[Biologie Moléculaire] D'une protéine à un gène à une protéine

En d'autres mots et via un exemple, est-il possible de copier un anticorps monoclonal si l'on ne dipose pas de cellules productrices (mais bien de la protéine/anticorps en question et en quantité suffisante).  [...] (5) Est-il seulement possible de protéger une protéine (tel qu'un anticorps monoclonal) et à quel niveau d'après vous au niveau peptidique ou génétique.  [...]

[Biologie Moléculaire] structure des protéines

Ici l'anticorps anti-proinsuline va réagir avec les protéines de proinsuline. On va donc par la suite pouvoir examiner la quantité ou les caractéristiques physiques de la protéine. On élimine ensuite les protéines qui ne sont pas liées à l'anticorps anti-proinsuline pour ne garder que les protéines de proinsuline.  [...] Non, une protéine ne réagit qu'avec un anticorps Donc pour réagir avec une protéine, il faut que l'anticorps reconnaisse l'épitope.  [...]

Problème RT-PCR sur cDNA

Par la façon dont tu exposes ton problème, j'ai l'impression que tu ne connais pas la structure exacte intron/exon de ton gène... J'imagine que c'est pour ça que tu séquences le cDNA. Une chose est sûre. entre les prédictions des sites d'épissages et une preuve biologique (ADNc séquencé), c'est la preuve biologique qui gagne.   [...] Une autre possibilité. un Western Blot avec un anticorps specifique du peptide que donnerait cet intron s'il était traduit. Si le Western est positif alors tu auras prouvé que cet intron est inclus et tu pourrais même estimer la quantité avec un anticorps contrôle spécifique d'une autre partie de ta protéine.  [...]

[Génétique] Rhesus ?

si l'une est absente, l'autre la remplace, ce qui peut expliquer la grande quantité des protéine D chez les sujets ayant une délétion au locus CE, ou les réactivités différentes des hématies selon le nombre de chacun des épitopes présents, lors d'une recherche d'anticorps irréguliers.  [...] - En ce qui concerne l'antigène D/d. Comme pour toute protéine de l'organisme, chaque undividu dispose de deux copies distinctes du gène. Il existe grossièrement deux possibilités de gène. soit le gène D qui code pour la protéine D, soit le gène d qui ne donne pas naissance à une protéine.  [...]

[Immunologie] Immunoprecpitation: liaison de la resine protG avec l'anticorps qui marche pas

Bonjour tous le monde. Je suis entrain de faire la mise au point d'une IP. pour se faire j'ai voulu juste tester le rendement de la résine protG avec l'anticorps sans rajouter la protéine d'intérêt. la résine ne capte même pas le 1/10 de la quantité de l'anticorps de départ qui est de 1µg dans 500µl de PBS avec 50µl de la résine.  [...] Je laisse la résine en contacte avec l'anticorps toute la nuit puis après je lave 3 fois avec du PBS et j'élue finalement dans 50µl de glycine 2.5.  [...]

[Biochimie] sérum et anticorps polyclonaux

j'aimerais quantifier et vérifier la taille de ma protéine favorite dans un ensemble d'échantillons par western blot. Jusque là pas de problème. Malheureusement, aucun anticorps commercial n'existe contre cette protéine et aucun article ne rapporte la réalisation d'un tel anticorps.  [...] Cependant, une compagnie me propose de mettre à ma disposition un sérum dirigé contre cette protéine. Si je me souviens bien mes cours de fac, un serum est un ensemble non purifié de tous les anticorps produits par un animal immunisé ce qui, par définition, entraine une spécificité très relative.  [...]