• Santé - Quantité, Produits, Amplification

[Biologie Moléculaire] Questions relatives à la PCR

Ainsi, je reformule. Lors d'une détection de la séquence Alu, qu'est-ce qui pourrait expliqué que j'obtienne une très faible quantité de produits PCR après amplification. La question ne se limite pas à cette expérience. Ce que je veux savoir c'est.  [...] Lors d'une détection de la séquence Alu, qu'est-ce qui pourrait expliqué que j'obtienne une très faible quantité de produits PCR après amplification.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

Bonjour, pour un travail j'ai besoin de savoir 8 raisons qui justifient une très faible quantité de produits PCR après amplification et 3 raisons qui expliqueraient des produits d'amplification multiples ou non spécifiques.  [...] De même, une faible stringence va entraîner une diminution de la spécificité de réaction de PCR et cela aura pour conséquence une amplification non spécifique.  [...]

[Biologie Moléculaire] quantitative/real time PCR quelle différence?

Alors que les systèmes de PCR en temps réel reposent sur la détection et la quantification d'un émetteur fluorescent pendant le processus d'amplification, et l'augmentation du signal d'émission fluorescente est directement proportionnelle à la quantité d'amplicons produites durant la réaction.  [...] Oui, à condition d'etre en phase exponentielle d'amplification. Ex. dans mes PCRq, a partir de 35 cycles environ, il y a un plateau, et la quantité d'ADN est identique dans tous les points et indépendante de la quantité initiale. Impossible de quantifier en fin de PCR.  [...]

[Biologie Moléculaire] RT-qrt-PCR : courbe de fusion et autres contrôles

Qu'est-ce que cela changerait qu'il y en ait eu. une plus faible probabilité de fixation des amorces sur l'ADN à amplifier, donc une diminution de la vitesse d'amplification, donc une mauvaise estimation de la quantité d'ADN initiale.  [...] Le principe, c'est que la vitesse d'amplification du produit (en phase expo) varie dans le même sens que la quantité d'ADNc présent dans l'échantillon. en quoi cela m'indique quel est le problème des dimères de primers et le rôle des différentes dilutions.  [...]

[Biologie Moléculaire] Courbes PCR en temps réel

Alors petit rappel. le principe de la PCR quantitative est qu'on est capable de suivre l'évolution de la quantité d'amplicon formée au fil des cycles. Pour cela, on a une matrice, une paire d'amorces ciblant la région que l'on veut amplifier, une enzyme, des nucléotides, et un colorant fluorescent de l'ADN.  [...] Pour s'assurer de la spécificité de l'amplification, on réalise a la fin des cycles d'amplification une rampe de température qui permet de déterminer le point de fusion des produits formés. Pour cela, on fait passer la température de 55 à 85° par petits intervalles tout en mesurant la fluorescence.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR en temps réel ou Q-PCR

Mais normalement, mes amorces de Q-PCR ne devraient-elles pas donner un produit de taille différente quand je fais un PCR sur du génomique et sur de l'ADNc Pourtant dans mon cas les deux produits obtenus ont le même poids, ce qui est fou. Je me demande si je loupe un train dans la compréhension de la technique ou si il s'agit simplement d'une contamination.  [...] Je m'obstine avec mon boss, qui me dit qu'il est possible sur un PCR classique, c'est-à-dire avec une quantité de matériel somme tout limitée, de faire une amplification d'un produit de plusieurs kb, il me semble que la polymérse se détacherait au bout d'un moment et que le nombre de dNTP pourrait venir à manquer.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème sur un exercice de génotypage

- Vous faites une PCR avec le premier marqueur puis les produits d'amplification sont séparés par électrophorèse et vous n'observez rien. Pourquoi.  [...] -Vous faites une PCR avec le premier marqueur puis les produits d'amplification sont séparés par électrophorèse et 5 individus ne présentent aucune bande. Pourquoi.  [...]

[Biologie Moléculaire] Efficacité PCR temps réel

Perso je fixe toujours le Ct manuellement, sinon ca donne n'importe quoi. Idealement, tu dois visualiser ton Ct sous forme de ligne sur le graph coupant les phases exponentielles d'amplification de tes produits. Cette ligne doit passee au milieu ou dans la moitie inferieure de ce graph (en log).  [...] Ou carrément il y a vraiment synthèse, à chaque nouveau cycle d'amplification, de plus de 2 fois la quantité d'ADN du cycle précédent.  [...]

Des chercheurs inventent un microscope qui marche à l'ADN

Les chercheurs ont d'abord créé des version ADN de l' ARN des cellules pour pouvoir les suivre. Ils ont ensuite marqué chaque molécule d'ADN avec une étiquette (des courtes séquences d'ADN), puis ont procédé à une amplification pour produire une grosse quantité de ces molécules marquées.  [...] Une illustration de la technique de microscopie à ADN. 1. Les molécules d'ADN sont amplifiées et étiquetées avec de petits morceaux d'ADN. 2. Une amplification permet d'obtenir d'importantes quantités d'ADN étiqueté. 3. Lorsque deux cellules sont à proximité l'une de l'autre, leurs étiquettes vont se lier pour créer une nouvelle étiquette unique (UEI).  [...]

[Biologie Moléculaire] Microsatellite genemapper

Généralement quand tu amplifies un microsat, tu as un grand pic qui correspond à sa taille, suivi de quelques pics décroissants situés chacun à une répétition de moins. Ca vient du fait que la Taq fait des erreurs quand elle amplifie des répétitions.   [...] mes primers ont été blastés dans un premiers temps et dans un second temps les produits PCR sont déposés sur gel agarose et j'ai bien une unique bande propre donc ceci c'est réglés.  [...]