• Santé - Quantité, Expression, Méthode

[biologie moléculaire] Info sur le slot blot

Est-ce que grace à l'electrophorèse du western blot on peut avoir une idée de la taille et de la quantité de protéine recherchée.  [...] cette methode permet de comparer l'expression d'une protéine d'un puit à l'autre d'un point de vue qualitatif mais ne donne aucune info concernant la quantité de protéine présent dans l'extrait.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comment analyser les résultats de PCR quantitative??? - Page 2

dans le labo ou je viens de débarquer, on me demande de quantifier l'expression d'un gène viral (virus à ARN) en qPCR, il semblerait que la meilleure méthode pour ça c'est la qPCR absolue qui permettrait d'avoir le nombre de copie exacte du gène dans le génome du virus afin de comparer ces résultats au nombre de particules virales derrière.  [...] je dois quantifié l'expression d'un gène et pour ça j'utilise la méthode des DDCt ( quantif relative, PCR en temps réel). quelqu'un pourrait m'expliquer ce qu'est le DDCt s'il vous plait.  [...]

Normalisation RT-PCR quantitative

Personnellement, je n'aime pas trop la méthode du delta delta de Ct, car je trouve que ça induit un biais supplémentaire. En effet, rien ne te dit que l'expression de ton fameux gène de contrôle n'est pas un peu modifiée quand même par le traitement. Je préfère doser soigneusement mes ARN au spectro et faire toujours ma RT avec la même quantité d'ARN (5µg) et rapporter l'expression du gène à la quantité d'équivalent ARN totaux.  [...] En ce qui concerne mon sujet de thèse, il traite de l'Influence de la lumière sur la ramification du rosier. En gros, la PCR quanti va me permettre de suivre l'expression de gènes candidats lors du débourrement du bourgeon axillaire de rosier, sous différentes conditions de lumière.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comment analyser les résultats de PCR quantitative???

Moi j'utilise la quantification relative, mais je regarde l'expression de gènes sous plusieurs conditions pharmacologiques. J'ai donc un témoin, qu'on appelle le basal, qui nous donne une quantité arbitraire d'ARNm en Ct, il représente l'expression basale.  [...] Je ressors ce sujet sur la RT QPCR, et plus particulièrement sur le calcul des quantité relative d'expression par la méthode des 2^DDCt.  [...]

[Biologie Moléculaire] augmentation expression et diminution quantité protéine

En effet, la qRT-PCR me donne une augmentation de l'expression de mon gène et le dosage de la protéine me donne une diminution de la quantité de cette protéine.  [...] En effet, l'inverse ne me choque pas trop (diminution de l'expression dû à un ARNm qui se dégrade rapidement, ou qui n'est pas très stable) mais l'inverse m'ennuie un peu plus.  [...]

[Biologie Moléculaire] Q-CPCR encore !

Je me pose la question, je souhaite comparer l'expression du gène A dans deux tissus (tissu 1 et tissu 2). Il se trouve qu'après extraction je me retrouve après plusieurs manips et une moyenne, une quantité d'ARN totaux dans le tissu 1 10 fois plus importante que dans l'autre.  [...] Je comprends ton problème, mais le truc, c'est que tu as moins d'ARN car tu as moins de cellules dans ton tissu, donc moins d'ARN. Or toi ce qui t'intéresse, c'est que savoir à quel niveau d'expression se trouve ton ARN dans une cellule donnée. Donc comparer ce niveau avec le niveau d'un gène stable, ou par défaut à une quantité X d'ARN (par ex la quantité d'ARN utilisé pour faire la RT), te permet de tenir compte de cette dilution des cellules.  [...]

[Biologie Cellulaire] Rapport quantité ADN/expression protéique Transfection transitoire

Rapport quantité ADN/expression protéique Transfection transitoire.  [...] En fait je souhaiterais avoir une expression plus faible de ma protéine d'intérêt (et pas forcement plus de cellules transfectées...).  [...]

Cancer du sein : un grand progrès en chirurgie

Un nouveau test de biologie moléculaire permet d'obtenir ce résultat en... 30 minutes. Baptisé OSNA ( One step Nucleic Acid Amplification ), il mesure la quantité d'un ARN messager signalant l'expression du gène CK19 (cytokératine). Cette quantité indique la taille de la métastase ganglionnaire éventuelle.  [...] A Saint-Etienne justement, le professeur Michel Peoc'h y recourt dans son service d' anatomie et cytologie pathologiques. Bien sûr, cette méthode est plus coûteuse que de ne rien faire du tout. Elle demande un service assez important pour immobiliser une équipe dans l'attente des résultats pendant une demi-heure.  [...]

Définition | Thérapie génique | Futura Santé

La thérapie génique est une méthode consistant à introduire des acides nucléiques ( ADN ou ARN ) dans les cellules d'un organisme pour y corriger une anomalie, comme une mutation, à l'origine d'une pathologie. Il s'agit souvent d'apporter un gène normal et fonctionnel ( transgène ) dans une cellule où le gène présent est altéré.  [...] Les acides nucléiques sont introduits dans les cellules du patient grâce à un vecteur viral ou injectés directement dans les cellules sous forme d'ADN nu. Les nouvelles méthodes d' édition génomique (CRISPR-Cas9) peuvent aussi servir à modifier le génome.  [...]

[Biologie Cellulaire] Protocole-Mesurer quantité de mitochondries

Je cherche un protocole qui permettrait de mesurer la quantité de mitochondries présente dans le foie entre différentes conditions de stress.  [...] En fait j'ai déjà mesuré l'expression du gène 12S sur le foie (poisson) entre différentes conditions. L'expression de ce gène peut être considéré comme un proxy de la densité mitochondriale. Donc pour confirmer les résultats que j'ai obtenu, j'aurais voulu pouvoir évaluer la quantité de mitochondries dans le tissu.  [...]