• Santé - Quantité, Cellules, Vecteur, Intégration

Thérapie génique : les raisons d'un échec

Les scientifiques estiment à environ 1 x 10 -5 la probabilité que l'insertion s'effectue dans un autre gène actif. Les bébés ayant reçu 1 x 10 6 cellules ou plus, ils ont donc statistiquement reçut entre 1 et 10 cellules dans lesquelles l'intégration du vecteur s'était faite dans une région active des chromosomes.  [...] 2. Désigner des sites d'intégration sans risque dans le génome, et construire des vecteurs capables de s'y intégrer spécifiquement.  [...]

[Biologie Cellulaire] A quoi sert le co-transfert avec un vecteur de résistance à un antibiotique

En fait, on fait une co-transfection car ton plasmide ou se situe ton cDNA ne contient surement pas de gène de résistance. Dans ce cas là, si tu veux sélectionner par la suite uniquement les cellules qui ont intégré le plasmide, il te faut pouvoir les sélectionner.  [...] Pourquoi ne pas faire un stable qu'avec le vecteur codant les recepteurs et cultiver en dilution limite pour établir des clones à partir de cellules isolées sachant que la proba d'intégration est de moins de 1 sur 1 million, ce serait impossible de trouver rapidement un clone stable.  [...]

[Revision] Besoin d'aide sur un exercice

Moi je dirai, que le vecteur contient des LINEs qui sont des séquences hautement répétées dans le génome, donc cela devrait favoriser la recombinaison et l'intégration... mais c'est pas garanti.  [...] Ah oui en effet c'est aussi une possibilite... les elements permettraient l'integration du vecteur neo, et en meme temps le gene cotransfecté. En fait faudrait connaitre la suite de l'exo pour voir si le but est de montrer que l'integration d'un vecteur favorise l'insertion du deuxieme.  [...]

[Génétique] Conséquence de l'intégration d'un vecteur dans une bactérie

Le problème c'est que notre prof nous a dit que la réponse ne se trouvait pas dans l'ampiciline, mais au fait que l'intégration que ce vecteur permet la production d'une protéine.  [...] Cela ne l'est pas dans une population de milliards de milliards de cellules se reproduisant vite, une petite différence au départ peut conférer finalement un avantage non négligeable. Sans parler des questions de plasmide multi-copies. C'est un principe général, on enlève la pression de sélection, le gène de résistance subit la dérive, voire même est contre-sélectionner si son maintien/ expression a un coup.  [...]

[Biologie Moléculaire] Système d'extinction conditionnel de gène in vivo

Jusqu'à présent, le labo dans lequel je viens d'arriver se contentait du système Cre/Lox pour invalider le gène spécifiquement dans les cellules du rein chez la souris.  [...] L'approche siRNA est simple, le knockdown transitoire dépend de la dilution progressive/dégradatio des siRNA injectés mais quid de son efficacité cad quelle quantité à injecter le ciblage spécifique du rein (en faite le shRNA peut très bien inhiber l'expression du gène dans d'autres organes).  [...]

Cellules souches : une nouvelle voie pour éviter les risques de tumeurs

Cette intégration, notamment, peut conduire à la formation de tumeurs, ce qui fait des rétrovirus des vecteurs dangereux pour la réalisation de cellules souches.  [...] Ce résultat est d'importance. Sur le plan théorique, il démontre que l'intégration dans le génome des gènes produisant les facteurs de transcription n'est pas indispensable. Sur le plan médical, il ouvre une voie mieux sécurisée pour produire des cellules souches réparatrices.  [...]

Mutagénèse insertionelle : gene-trapping

Quand on utilise un vecteur rétroviral, je me doute très bien que pour l'insertion il n'y a pas besoin de régions homologues, car on se sert de la machinerie d'intégration du rétrovirus.  [...] Mais quand on utilise un vecteur plasmidique, comment peut se faire l'intégration Car pour les transfections stables classiques, on flanque notre séquence à insérer par des séquences homologues et le tour est joué, mais là, il n'y en a pas, et il ne peut pas y en avoir, donc.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteurs intégratif+inductible

Sinon pour les vecteurs je peux te conseiller ceux vendus par clontech qui ont un promoteur inductible (tet- doxicycline) certains ont meme la GFp, la RFP etc.  [...] ce qui m'étonne un peu, c'est que souvent en transitoire, il y a plusieurs copie du vecteur par cellule, donc l'expression est plus forte qu'en stable. Dans mon cas, j'observais souvent une réduction de l'expression apres etre passé en stable.  [...]

recombinaison homologue

Ces vecteurs possèdent une origine de réplication fonctionnant dans E. coli, mais pas.  [...] mutée au niveau de ce gène. Ce gène sert aussi pour l'intégration du vecteur dans le locus.  [...]

[Biologie Cellulaire] Résolution de probleme de manipulation

solution. produire des précurseurs protéique de telle manière que la maturation de la protéine se fasse a l'extérieur de la cellule.  [...] Evites de choisir des couleurs de police illisibles en fluo. Je l'ai changée pour une couleur foncée. Je te rappelle rapidement que dans les choix de couleurs, le vert est réservé à la modération.   [...]