• Santé - Quantité, ARN, Cellules

[Biologie Moléculaire] Q-CPCR encore !

Au fait quand tu fais ton extraction, ce sont des ARN totaux ou des ARNm spécifiquement Si effectivement tes cellules expriment des quantités différentes d'ARN, faudrait voir la part des messagers par rapports aux autres, pour voir lors de ton dosage par spectro si des différences d'expression des ARNm influent bcp sur la quantité calculée.  [...] J'aurais tendance à dire que non, mais je ne suis pas un spécialiste des ARN. Tout ce que je sais, c'est que si j'induis la transcription de gènes cibles d'hormone dans des cellules en culture, je n'ai pas d'augmentation de la quantité totale d'ARN dosée au spectro, alors que par RTqPCR je vois une belle induction d'au moins une 10aine de gène.  [...]

[Biologie Moléculaire] qPCR sur espèces proches mais différentes

tu pourrais relativiser tes qPCR en utilisant l'ADN des mouches dont tu as extraits les RNA. Tu amplifies l'ADN du gène que tu cherches (2 copies par cellules) et tu exprimes la quantité d'ARN en % d'ADN.  [...] Idealement tu utilises les memes amplicons. en traitant les ARN extraits a la DNase avant la RT et en faisant un controles RT- tu t'assures de ne pas amplifier de contaminants ADN a la place de tes ARN.  [...]

De nouveaux antiviraux qui ciblent la cellule hôte

Stratégie du criblage de l'effet des microARN sur l'infection virale. Le mime (bleu) ou le piège (rouge) du microARN est inséré dans les cellules animales. Après 60 heures, la toxicité des microARN est vérifiée (à gauche), puis les cellules sont infectées par du virus fluorescent (à droite).  [...] Pour augmenter ou diminuer la quantité des microARN dans les cellules, les chercheurs ont utilisé des molécules qui les miment (un microARN identique), ou qui les piègent (un ARN complémentaire qui va séquestrer le microARN). Ces molécules (312 différentes) ont été insérées dans des cellules animales in vitro.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ARN pour puce

j'essaye d'extraire des ARN bactériens à partir d'un nombre restreint de cellules dans une solution qui contient pas mal de proteines. déjà c'est pas très simple d'avoir une quantité suffisante pour puce (10µg), et en plus je viens de les vérifier sur une puce agilent et je me rend compte que la plupart de mes arn extrait sont des 5s.  [...] Effectivement, dans ces conditions vos ARN ne seront pas protégés dans la mesure où ils se trouvent dans les cellules. Avec le stress du au trizol, c'est là qu'elles relarguent des RNases bien à l'abri dans le cytoplasme. 1/2h c'est trop long.  [...]

[Biologie Cellulaire] Endoduplication

je viens de lire que la quantité d'ADN peut varier dans une même plante, selon les différents organes, tissus...cela par des mécanismes d'endoduplication. J'aimerais savoir pourquoi les cellules nécessiteraient d'endodupliquer leur génome est-ce possible que cela soit une nécessité d'avoir plus d'ARN, plus de certaines protéines.  [...] L'endoduplication porte aussi le nom d'endoréplication. Cela consiste en une synthèse d'ADN sans mitose, qui a différente fonctions.   [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ARN

c'est laaaargement suffisant pour descendre les cellules, s'il y en a. Vous devriez faire un comptage pour voir combien vous avez de cellules (ou une mesure de la quantité d'ADN avec une technique très sensible). A mon avis le problème ne vient pas du protocole mais de la pauvreté en matériel.  [...] Avant j'extrayais l'ARN sur tisssus et pour lyser, j'utilisais le phénol -choroforme, quand je suis repassé sur cellules, j'ai testé le phénol-choroforme/kit RNeasy vs kit RNeasy, j'avais + en quantité et l'arn de meilleure qualité, du coup je suis resté avec ce protocole.  [...]

Cancer : du brocoli et des choux de Bruxelles contre les tumeurs

Pour le savoir, des chercheurs de l'université de l'Oregon se sont penchés sur le rôle joué par de longs ARN non-codants appelés IncRNA en anglais. Bien que sans fonction particulière, ces ARN pourraient être impliqués dans la transformation des cellules en cellules cancéreuses.  [...] Ils ont ainsi montré que la capacité des cellules cancéreuses à former des colonies était divisée par quatre en l'absence de l'ARN LINC01116. cet ARN peut donc jouer un rôle dans le développement du cancer. Or, un traitement au sulforaphane limite sa transcription et réduit ainsi la quantité d'ARN LINC01116.  [...]

Des chercheurs inventent un microscope qui marche à l'ADN

Les chercheurs ont d'abord créé des version ADN de l' ARN des cellules pour pouvoir les suivre. Ils ont ensuite marqué chaque molécule d'ADN avec une étiquette (des courtes séquences d'ADN), puis ont procédé à une amplification pour produire une grosse quantité de ces molécules marquées.  [...] Une illustration de la technique de microscopie à ADN. 1. Les molécules d'ADN sont amplifiées et étiquetées avec de petits morceaux d'ADN. 2. Une amplification permet d'obtenir d'importantes quantités d'ADN étiqueté. 3. Lorsque deux cellules sont à proximité l'une de l'autre, leurs étiquettes vont se lier pour créer une nouvelle étiquette unique (UEI).  [...]

Isolation ARN

Bon alors j'ai besoin d'isoler les ARN totaux de cellules (fibroblastes plus precisement) en culture monolayer. J'utilise la methode du Trizol (popurquoi aller payer cher des kits alor que ca ca marche). Mais comme je n'ai qu'un petit nombre de cellules, donc une petite quantite d'ARN, j'ai lu qu'il faudrait utiliser un carrier, coööe le glycogene.  [...] Et si quelqu'un est familier avec cette technique, pourriez-vous m'indiquer quelle quantite de glycogene vous utilisez, et si il doit absolument etre certifie RNase-free. (dans la litterature ca varie beaucoup je trouve).  [...]

[Urgence] question

Voilà mon problème je microdissèque des cellules cancéreuses de prostate et je me demandais quelle était la quantité d'ARN dans une seule de ces cellules. Comme je fasi de l'extraction avec passage sur puce ensuite, cela m'aidera beaucoup.  [...] Il est vrai que ma question peut paraître un peu saugrenue mais comme je travaille sur de petits échantillons maximum 10000 cellules (et je dis bien maximum) prostatiques, j'ai quelques difficultés à extraire correctement mes ARNs je pense que je suis limite par rapport à mon kit d'extraction.  [...]