• Santé - Quantité, ADN, Plasmide

[Biochimie] Calcul d'une concentration en ADN

Que souhaitez vous faire exactement Trouver la masse d'ADN présent dans l'échantillon initialement Trouver la quantité d'un plasmide présent initialement dans la solution.  [...] Le but de l'exo est de déterminer la quantité d'ADN plasmidique dans une solution de 100mL. On sait que la taille du plasmide est de 3500pb. On introduit dans la solution des enzymes qui détachent les sucres, bases et phosphates les uns des autres, puis on détermine qu'il y a 9,8g d'unité osidique dans la solution.  [...]

a l'aide : double hybride en levure!!!!

Q.quantité d'ADN utilisée lors de la cotransfo (en µg). Attention, il s'agit de la quantité de plasmide limitante (par exemple si tu as mis 5 µg de plasmide appât et 2 µg de plasmide de la banque, Q=2).  [...] Exemple.J'ai transformé 15 µg de ma banque avec 5 µg de mon plasmide appât. j'ai donc Q = 5. J'ai resuspendu ma co-transfo dans Vtot = 10 mL. J'ai pris 1 µL de la co-transfo, que j'ai mis dans 99 µL de milieu adéquat. ça me fait donc une dilution au 1/100 que j'étale sur ma boîte de Petri (en schématisant rapidement).  [...]

[Biologie Moléculaire] Digestion enzymatique

1- Si l'on considère que 5 ug d'ADN plasmide de pUC19/GFP a été complètement digéré (par EcoRI), il est donc possible de calculer la quantité théorique d'ADN du gène de GFP que l'on peut isoler sur un gel d'agarose. Comment procéder Quelle sera la quantité obtenue du gène GFP si l'on considère que le rendement d'isolement d'ADN (en l'occurence 5 ug) sur gel d'agarose est de 90%.  [...] Les tampons sont choisis en fonction de leur compatibilité avec l'enzyme choisis, il existe des tableaux reprenant l'efficacité des enzymes (en %) en fonction du tampon utilisé.   [...]

[Biologie Moléculaire] Question purification QIAprep

Le truc que je ne m'explique pas trop c'est que quand je ne mets pas de chlormaphénicol, il n'y a pas de smears, c'est propre (même si la quantité de l'ADN plasmidique n'est pas vraiment terrible ). Je ne blinde pas avec des bactos non plus dans ce cas. Qu'est-ce que ce truc.  [...] En fait le Cm va inhiber la traduction, du coup les cellules vont arreter de pousser, mais la replication de l'ADN va continuer. Ta DO va donc etre stable, mais la quantite d'ADN et donc de plasmide va augmenter. Du coup tu vas recuperer plus de plasmide tout en utilisant un kit pour une miniprep.  [...]

Bactéries et microbes en tout genre | Dossier

Elles contiennent également d'autres molécules d'ADN appelées plasmides, qui portent les gènes de résistance aux antibiotiques. Ces plasmides sont très utilisés en recherche. En intégrant un gène dans un plasmide, on peut obtenir une grande quantité de ce gène car la multiplication des bactéries est facile et rapide.  [...] Les bactéries ont une importance considérable dans les cycles biogéochimiques comme le cycle du carbone et la fixation de l' azote de l' atmosphère. Les bactéries sont ubiquitaires et sont présentes dans tous les types de biotopes rencontrés sur Terre. Les bactéries sont microscopiques, mesurant pour la plupart d'entre elles entre 0,5 et 5 micromètres.   [...]

[Biologie Moléculaire] Protocole pour une ligature + tranformation ?

Ensuite mettez vos ADN de sorte d'avoir grossièrement la même quantité (on parle en quantité pas en masse) des uns et des autres (Par exemple 500ng de plasmide. la photo vous y aidera). Completez si besoin avec de l'eau et là deux écoles.  [...] Sinon, concernant les quantités insert/plasmide, je mets généralement un rapport de quantité 3.1. Par exemple, une de mes ligations est du genre. un plasmide qui fait 5,4 kb, je choisis d'en mettre 60 ng. un insert qui fait 1,3 kb. Si je veux être en conditions 3(insert). 1(plasmide), je mets 45 ng de l'ADN d'insert.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gros problème.....

Nous avons donc pensé que la quantité d'ADN était peut être inhibitrice à trop forte concentration, j'ai donc recommencé deux PCR à partir de mon extrait plasmidique.  [...] Tu sous entends donc que tu as dosés l'ADN de ta suspension de bactos pour m'assurer que tu as la même quantité d'ADN que dans la PCR sur plasmide miniprep Tu dilues ton plasmide dans quoi pour arriver à 20ng/ml apres la maxiprep et la miniprep H2O, TE As tu vérifié les plasmides sur gel.  [...]

Precipitation adn plasmidique

Bonjour, après une extraction d'adn plasmidique avec un kit qiagen, je me retrouve avec de faibles concentrations de plasmide. Je souhaterais donc le concentrer un peu afin de pouvoir par la suite le sequencer.  [...] Autre solution tu rajoute a ta culture sur la nuit un peu de chloramphenicol pendant quelques heures. Ca bloque la multiplication des bacteries mais n'affecte pas pas la replication de l'ADN. donc tu augmente la quantité de plasmide dans tes bacteries.  [...]

[Biologie Moléculaire] Protocole digestion

Une question. quelle quantité d'ADN plasmidique devrais-je mettre Mon plasmide a une concentration de 150 ng/ul, j'ai fait mon calcul pour le nombre d'unités d'enzyme pour 1 ug d'ADN plasmidique. Est-ce une quantité cohérente (mon clonage ultérieur sera un peu ch****).  [...] Je me demandais si cette quantité de plasmide est donc suffisante pour ce que je veux faire (c'est la toute première fois que je fais un protocole de digestion ).  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR quantitative

La Q PCR c'est établir une gamme étalon d'un ADN controle ( Quantité d'ADN au départ connu) généralement un plasmide avec 1000, 10 000 100 000 et enfin 1 000 000 copies et définir pour chaque quantitées le nombre de cycle néssaires pour avoir un signal différent du bruit de fond (le cT) celui-ci est donc inversement proportionnelle à la quantitée d'ADN du départ.  [...] Plus il y à d'ADN au départ dans l'échanillon plus le cT arrive vite. On peux alors définir la quantitée d'ADN dans un échantillon X en le placant sur la droite. C'est la seul utilitée de la Q PCR. détérminer le nombre de copie ou quantité d'ADN dans l'échantillon du DEPART.  [...]