• Santé - Quantité, ADN, étape

transgenèse

coli par ex pour multiplier cette séquence d'adn qui nous intéresse. C'est l'étape nécessaire de multiplication de la construction génétique pour disposer d'une quantité suffisante d'adn à intégrer afin d'avoir des chances raisonnables de réussir la transgénèse proprement dite.  [...] Seules sont conservées les séquences bordantes de l'ADN T, indispensables pour le transfert, qui encadrent la construction génétique que l'on souhaite intégrer dans la plante (un gène d'intérêt accompagné généralement d'un (ou de) gènes permettant la sélection des cellules transformées).  [...]

[Biologie Cellulaire] d'ou vient l'ADN mitochondrial

sinon oui pour la fécondation je ne comprends pas pourquoi un coup on a 2 n K ( K = chromosome) avec une quantité d'ADN = 2 puis 4 jai du raté une notion du programme de term.  [...] Peux-tu expliquer avec des mots simples combien de chromosomes as-tu à chaque étape Et dire ce que signifie exactement quantité d'ADN = 2 (ou 4,...).  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage

le programme classique de PCR ne marchant pas, il a été modifié (étape d'hybridation passé de 52 à 50°C) c'est avec ce changement+ des variations de quantité d'ADN que j'ai réussi a obtenir 1-2 fois un très léger signal (sur gel agarose 1%+BEt), mais depuis plus rien, tout a été testé (augmentation du temps d'élongation, des concentrations en ADN, passage de l'étape d'hybridation a 50 et 45°C durant 2min et température augmentée, TA cloning) je suis donc dans une impasse puisque je n'arrive pas a obtenir cet insert, donc si vous avez des idées je suis preneur. merci.  [...] hahaha. revirement de situation. la séquence ne peut pas etre synthétisée à cause de longue portion de G/C qui rende la synthèse impossible...j'ai fait hier une PCR avec 5% de DMSO et une première étape de PCR a 94°C durant 3min puis en cycle (94°C 45 sec, un gradient pour la temperature du Tm de 50 à 70°C, et l'elongation)-.  [...]

[Génétique] la meiose

donc au debut dans la cellule DIPLOIDE on a 2n chromosomes (=6) donc 1.8m d'ADN ensuite pdt la prophase on a la duplication des chromosomes et ainsi on a 6 chromosomes DUPLIQUéS (4n) (et non 12 chromosomes.) à ce stade la quantité d'ADN est de 3.6m.  [...] Pour en finir...,au debut et a la fin de la premiere meiose on a à chaque fois 1.8m d'ADN mais comme le nombre de chromosomes est passe de 6 à 3 chromosomes on dit qu'on est passe de la phase diploide à la phase haploide...(la quantite d'ADN reste constante durant cette premiere etape,c'est seulement tt à la fin (apres la deuxieme meiose) que la quantite d'ADN sera égal à 0.9m dans chaque gamete).  [...]

[Biochimie] Mecanisme de ligation SOS clonage

Il manque de nombreuses informations pour que nous puissions t'aider. As-tu fais des vérifications sur gel d'agarose après chaque étape pour vérifier la qualité et la proportion de ton matériel la quantité d'ADN obtenu après PCR me laisse envisager que la PCR n'a pas marché.  [...] Mon clonage a encore echoué j'ai refais la ligation la denriére fois en diluant le milieu reactionnel et en augmentant la quantité de ligase, j'ai aussi opté pour l'incubation en bain marie. En plus, j'ai transformé deux bactérie pour verifier la compétence (top 10 et JM109) avec ça j'ai effectué la ligation avec plusieurs rapport insert / vecteur,j'ai vraiement tt essayé mais rien.  [...]

recherche d'un contact par mail avec un laborantin - Page 2

En fait, l'étape de purification de l'ADN n'est plus obligatoire, surtout que l'on travaille avec des quantités infimes d'ADN. Le problème de ne pas purifier, c'est que les protéines de la cellule peuvent venir perturber la réaction PCR. D'où l'étape de purification de l'ADN, afin d'enlever un maximum de protéines.  [...] Tolistento, en relisant toutes vos interventions, ( sur les autres fils que vous avez ouverts également) on a vraiment l'impression qu'elles ont un but bien précis et ne sont pas simplement de la curiosité. Lequel, si ce n'est pas trop vous demander Parce que vous auriez sans doute une réponse plus rapide si vous nous disiez ce que vous cherchez à démontrer ou à prouver, plutôt.   [...]

[Biologie Moléculaire] lors de la purification de l'ADN plasmidique

je voudrais savoir est ce que le phenol-chloroforme appartient au étapes de la purification de l'ADN ou la précipitation de ceci par l'éthanol reste la dernière étape de la purification.  [...] l'étape de phénol/chloroforme permet de faire précipités les débris cellulaire et les protéines pour s'en débarrasser. Cette étape est généralement suivie d'une étape de chloroforme pure qui permet de ce débarrasser d'éventuelles trace de phénol. Enfin, l'ADN est précipitée par un mélange éthanol 100% + sel, à froid.  [...]

[Biochimie] enzyme "détruite" à haute température?

On dérive hors-sujet... Rapidement pour que ce soit clair, la première étape de dénaturation de la PCR est bien plus longue (2-5 minutes à 95°C) que ce qui est nécessaire pour dénaturer l'ADN, 15-20 secondes à 95°C que l'on retrouve dans tous les cycles. La première étape est nécessaire pour activer les Hot Start qui ont l'avantage de ne pas être actives tant que cette étape n'est pas effectuée, elles ne dégradent donc pas les primers avec leur activité correctrice le temps de lancer la PCR.  [...] La dénaturation de l'ADN n'est pas le but de cette étape, il y a toujours une étape de ce type et qui sera répété lors du cycle même. Cette étape d'activation n'a lieu qu'une fois au début de la PCR.  [...]

apoptose cellulaire / fragmentation de l'ADN

Une partie de l'étude va être sur l'ADN fragmenté, sauf que sur le protocole que j'ai, à aucun moment il n'y a d'étape pouvant libérer l'ADN.  [...] Je pensais rajouter une étape SDS-HCl après la 1ère centri, mélanger doucement, centri et là récupérer le surnageant contenant l'ADN (si je ne me trompe pas) et faire migrer ça même si l'extrait n'est pas pur, je veux juste voir l'état de mon ADN.  [...]

ARN-ADNc

Juste une petite question. en partant d'une quantité bien définie d'ARN, combien obtient-on d'ADNc après une étape de RT. 2 fois plus, la même quantité ou autre... Je considère, bien sûr que la réaction est totale.  [...] En effet les RT n'ont a priori pas d'activite ADN polymerase, ADN dépendant. Deplus les RT non modifiée possede une activité RNAse H qui va degrader le brin d'ADN en duplexe avec l'ARN.  [...]