• Santé - Quantité, ADN, Digestion

[Biologie Moléculaire] détection de gènes multicopies

Tout d'abord j'avais penser faire une digestion de mon adn, puis faire migrer, suivi d'une hybridation avec une sonde radioactive et j'aurais alors pu voir si une ou plusieurs bandes s'allumaient. Malheureusement cette technique nécessite une grande quantité d'adn que je n'ai pas.  [...] en PCRq c'est possible, la difficulté étant de savoir a quelle quantité de référence se rapporter. Par contre en FISH je vois pas comment on peut faire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comment pRb peut-elle augmenter l'activité d'un promoteur ?

Grâce à une méthode de marquage d'un seul des 2 brins d'ADN suivie d'une digestion avec une très faible quantité de DNase d'ADN incubé avec C/EBP5 seul ou C/EBP5+Rb on conclut que c'est 2 facteurs se fixent sur un même module.GC.  [...] La première expérience consiste à digérer l'ADN de façon aléatoire. la DNase va donc couper partout, sauf là où est fixé le ou les facteurs. On a donc des fragment de toutes tailles. Ensuite un trou est visualisé par électrophorèse, qui correspond à l'endroit où se fixe le facteur.  [...]

[Biologie Moléculaire] Fréquence de sites de restriction

Tout dépend des conditions de ta digestion, notamment de la quantité d'ADN génomique que tu fais digérer pour une certaine quantité d'enzyme.  [...] En général, 1 U d'enzyme est définie comme étant la quantité suffisante pour digérer 1microgramme d'ADN d'un génome connu (le plus souvent, l'ADN du phage lambda).  [...]

prédire digestion ADN DNAse1?

Par contre, mon BAC DNA est de 160kb de long, j'ai décidé d'utiliser 0,6ug de BAC DNA pour 6 ul de DNase 1. Après digestion, je ne vois pas de bandes sur mon gel électrophorèse et ma concentration au spectrophotomètre est beaucoup trop basse pour continuer l'expérience.  [...] Pour optimiser l experience, tu peux fixer la quantite d ADN a digerer et utiliser differentes quantites de DNAse et differents temps de digestion et regarder ensuite quelle est la meilleur condition.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage en plasmides de grande taille via Sfi I (astuces)

Rapport vecteur.insert 1.10 ok mais tu utilises quelle quantité exactement d'ADN Et tu transformes avec quelle volume de ta ligation (pour quel volume de bactéries ).  [...] la digestion je la fais géneralement avec 1,5 µl d'enzyme 1Hà 37°C. mais comme le signal obtenu après dépos sur gel est trop faible, j'ai augmenté la quantité d'ADN digeré (80µL dans 350 final) avec 5µl d'enzyme de digestion 1h 37°C(j'ai essayé d'amplifier le fragment par pcr, ça ne marche pas).  [...]

[Biologie Moléculaire] Résolution gel d'agarose

Soit cette deformation ne te gene pas pour voir ton resultat et je te conseille e laisser tomber, soit c'est vraiment critique et la je te conseille de digérér une plus grosse quantité d'ADN, de passer la digestion sur une colone de purification (utiliser pour les PCR).  [...] - Comme on te l'a souligné, ça peut venir (avec la plus grande probabilité) de la quantité infime de ta digestion et/ou l'efficacité de(s) l'enzyme(s) de restriction utilisées.  [...]

[Biologie Moléculaire] TP digestion ADN par enzymes de restriction par électrophorèse sur gel d'agarose

Tu digères ton ADN de phage, tu te retrouves donc avec plusieurs morceaux d'ADN de différentes tailles que tu sépares sur un gel d'agarose pour voir leurs tailles (en comparant avec le marqueur de poids moléculaire qui sert d'étalon) et savoir combien de sites de restriction il y a dans ton ADN de phage.  [...] D'accord donc si j'ai bien compris si je n'obtiens pas de fragments, c'est à dire que je reste avec la molécule d'ADN de départ ça veux dire qu'il n'y a pas eu digestion, alors que si je trouve plusieurs fragments qui sont à des positions différentes car migré de manière différente ça veux dire que mon fragment d'ADN initial a été digérer c'est ça.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction de l'ADN et digestion enzymatique

Je suis actuellement en train de rédiger mon compte rendu de TP concernant une extraction d'ADN et une digestion enzymatique par 3 enzymes (EcoRI, BamHI et HindIII), en faisant le TP, notre professeur ne nous a pas vraiment expliqué, je dirais même qu'il n'a donner aucune information.  [...] Je les ai légender après en fait et pour le deuxième le professeur dit que les bandes juste en haut qui sont très claires sont de différentes tailles mais il a rien dit de plus, théoriquement nous devrions avoir une deuxieme bande en bas mais je suppose aussi qu'il n'y avait pas assez d'ADN.  [...]

Il y a t'il de l'ADN animal dans les excréments humains ?

Je me suis demandé récemment si la digestion de la viande animale qu'on mange détruit tout l'ADN de ses animaux ou s'ils subsistent toujours de l'ADN dans nos excréments qui pourraient même encore indiquer quel genre d'animal on a mangé Je sais aussi qu'on y retrouve de notre ADN mais est ce qu'il y a une interférence entre les deux s'il subsiste de l'ADN animal.  [...] Après, il faut rajouter les probabilités. Il faut que la bonne séquence d'ADN (dont le gène artificiellement ajouté/modifié pour les OGM) survive sans mutation ni coupure fatale à la digestion. C'est grand un génome, surtout les génomes eucaryotes. Après, il faut que ce morceau d'ADN nu rentre dans une cellule.  [...]

real time pcr

Vous ne pouvez pas proceder avec le trizol Plus simple (autant qu'une extraction d'ADN), pas de phase de digestion de l'ADN (le trizol le bouffe)... tout pour soit quoi.  [...] Bon, maintenant j'ai refais des RTqPCRs hier et j'avais oublié un truc. Dans le kit qiagen que j'utilise pour mes RTs il y a une phase dite G-wipe qui dégrade l'ADN génomique. Comme ca, la question est réglée, je fais comme vous (seulement avec ces merveilleux kit maudits de chez qiagen, on ne sait même plus ce que l'on fait tellement c'est simple.).  [...]