• Santé - Protocoles, Sens, Protéine, Intérêt

[Biologie Moléculaire] His-tagged protein ?

Pouvez-vous s'il-vous-plaît m'indiquer en quoi consiste la méthode de marquage de protéines avec une chaîne d'histidine.  [...] On ajoute 6 histidine en début ou en fin de protéines. Ces molécules ont une grande affinité pour le cobalt ou le nickel. Ca simplifie les protocoles de purification en ce sens que l'on est plus obligé d'utiliser un protocole spécifique de la protéine d'intérêt.  [...]

Vers une meilleure connaissance des virus qui attaquent le cerveau

L'hypothèse d'une contribution possible du Bornavirus dans certaines maladies psychiatriques comme la schizophrénie, bien qu'encore débattue, souligne l'intérêt de ce virus pour une meilleure compréhension des mécanismes pathologiques en jeu dans ces maladies.  [...] Daniel Gonzalez Dunia et son équipe démontrent ici que le virus bloque la réponse des neurones à certains protocoles de stimulation, sous-tendant un défaut d'apprentissage des neurones infectés. En analysant plus précisément les mécanismes moléculaires sous jacents, les auteurs montrent que ce blocage serait dû à une interaction entre une protéine du Bornavirus comprenant un groupement phosphate très réactif et une protéine cellulaire, qui, pour être active, et jouer son rôle de molécule-signal au sein de la cellule, doit être phosphorylée.  [...]

[Biochimie] Méthodes de purification du lysozyme

Avec le calcul de l'activité enzymatique j'ai un enrichissement de 16 pour un rendement de 32%. Je trouve que ma purification demande un sacrifice trop important pour un si petit résultat. Dans la partie discution de mon rapport je voudrais dire qu'une autre méthode aurait pu me permettre d'avoir un meilleur taux de purification avec un meilleur rendement, mais voilà, je n'en trouve pas sur internet concernant spécifiquement les protéines.  [...] Si tu disposes d'anticorps spécifiques (ce qui est le cas pour le lysosyme je suppose), tu peux faire une chromatographie d'immunoaffinité (les groupements chargés négativement de ta résine sont remplacés par des anticorps spécifiques de ta protéine). tu peux trouver des protocoles sur internet, en utilisant ce terme ou bien immunocapture.  [...]

Technique du Double Hybride

Je voudrais me renseigner sur la technique du double hybride. Je connais le principe général et son utilité pour connaître le lien et les interactions entre une protéine connue et des protéines inconnues, mais ce que je voudrais en fait ce sont des protocoles et des informations précises et concrètes sur l'utilisation de cette technique.  [...] même si tu isoles une protéine qui a répondu à toutes les exigences des vérifications, il faudra utiliser d'autres approches complémentaires pour confirmer ton interaction (notamment une approche biochimique, voir le post de Lios). L'idée, c'est qu'il faut obtenir différents résultats avec différentes techniques pour avoir un faisceau de présomption permettant de penser qu'il y a bien interaction &en clair, une interaction protéine-protéine déduite uniquement sur la base du système Y2H, c'est complètement naze.  [...]

[Biologie Cellulaire] Cytométrie en flux

Bonjour tout le monde, petite question technique...je voudrais regarder la différence d'expression d'une protéine par cytométrie en flux dans 2 populations différentes une de lymphocytes T sains et l'autre de lymphome, comment je peux faire pour marquer les populations sachant qu'il n'y a pas a ma connaissance de marqueur spécifique sur les lymphocytes tumoraux est ce que je peux marquer une population AVANT avec un anticorps fluorescent par exemple anti CD4 ou CD8, mais apres quand les é populations vont être mélangées est ce que l'anticorps va tenir et va pas se décrocher pour aller sur les autres qui expriment aussi le CD4ou8 merci de m'aider.  [...] en fait je prépare un concours avec un sujet de thèse fictif ou je dois élaborer un projet fictif et je n'ai pas de labo pour m'aider pour l'instant alors je pensais venir sur ce forum pour obtenir un peu d'aide car je me sens un peu seule et pour moi pour progresser j'ai besoin de discuter et d'intéragir sur les idées, les protocoles, etc.  [...]

[Microbiologie] Bactéries à intérêt biotechnologique

je suis en première année doctorat en biologie moléculaire appliquée. mon thème c'est la caractérisation moléculaire des bactéries à intérêt biotechnologique, il est un peu vaste (j'ai demandé à mon encadreur et elle m'a conseillé le domaine agroalimentaire).  [...] SVP je veux savoir les protocoles qu'il faut faire pour arriver à montrer qu'ils ont intérêt biotechnologique ou bioremédiation.  [...]

[Biochimie] Nickel et congélation ...

Heureusement que j'avais tout noter...ou presque...et oui mon problème se situe là... Je vais pas vous faire attendre plus longtemps j'aurai besoin d'un protocole de surproduction de protéine et de purification, ma prot fait dans les 15Kda et je l'avais fait par colonne de nickel.  [...] Je vais pas vous faire attendre plus longtemps j'aurai besoin d'un protocole de surproduction de protéine et de purification, ma prot fait dans les 15Kda et je l'avais fait par colonne de nickel.  [...]

[Génétique] RT-PCR, ADNc double brin

Je sais qu'on commence par extraire les ARNm de la cellule, et qu'on utilise une reverse transcriptase pour faire un ADNc complémentaire à l'aide d'une amorce poly(T).   [...] c'est en effet une amorce qui se trouve en 5' du gène d'interet. sinon dans certains protocoles on met des sequences adaptatrices pour pouvoir amplifier avec des amorces universelles.  [...]

[Biologie Cellulaire] cultures cellulaires primaires

j'ai besoin de savoir l'intéret de chaque réactifs surtout pour DMSO et DMEM qu'on effectue sur cellules humaines cancéreuses pour les cultivés ( avec un schéma de protocoles de cultures ) si c'est possible.  [...] Ensuite, un schéma de protocole de culture, ce n'est pas assez précis. Cela dépend encore des cellules, certaines sont adhérentes d'autres surnageantes par exemple et pour chacun de ces cas le protocole sera différent.  [...]

Clonage reproductif : des clones de mammifères anormaux ?

Il a pu relier ces différences à des modifications des patrons de méthylation des nucléotides des séquences géniques concernées. Ainsi, ces modifications qui affectent l'expression des gènes ne touchent pas les séquences concernées de la même manière entre animal cloné et contrôle alors que la séquence ADN au niveau génomique est une parfaite reproduction de l'original.   [...] Les applications au clonage reproductif des mammifères, pris dans son sens strict (création d'une réplique parfaite) avec les protocoles existants apparaissent ainsi intrinsèquement limitées par des facteurs épigénétiques.  [...]