• Santé - Protocole, Marquage, Classique

[Immunologie] Méthanol et marquage extracellulaire

j'essaye de faire un marquage intracellulaire de phospho Stat5sur des cellules T (souris). Le protocole implique le marquage extracellulaire classique (marqueur CD4, CD25), la phase de fixation puis perméabilisation utilisant PFA et méthanol.  [...] Mais en utilisant le méthanol, je perds tous mes marquages extracellulaires.  [...]

[Biologie Cellulaire] adaptation protocole confocal à cytométrie en flux

Est-il possible de maintenir mon protocole initiale en ne trypsinnant qu'à la fin ou la trypsinne risque -t-elle de dégrader mon marquage.  [...] - dans mon protocole de marquage 'classique', j'incubais mon primaire overnight à 4°C et dans la plupart des protocoles pour cyto flux le temps d'incubation est plus de l'ordre de la demi heure à 4°C.  [...]

Random priming : sans cycles de température?

Je m'étonne quelque peu, car dans mon protocole de marquage par random priming, j'ai la possibilité de préparer mon mix de marquage pour n réactions (4 en l'occurrence). Je comprends donc que réactions fait allusion à une amplification...Pourtant, l'étape de marquage se déroule à 37 °C, du début à la fin.  [...] Autant pour moi, n réactions concerne le nombre d'échantillons à marquer.  [...]

[Divers] Protocole de marquage des vaisseaux sanguins

il faut utiliser un marqueur de CD31 ou CD34 ou encore isolectine B4 qui marche très bien. De l'encre de Chine pourrait bien marcher... Mais là encore tout dépend si vous voulez injecter l'animal en intracradiaque, faire un marquage sur coupe... etc.  [...] D'où l'idée d'un marqueur circulant dans le réseau sanguin, donc qui n'est pas spécifique des vaisseaux (tel que IB4 ou CD31), sinon il reste accroché dessus et ça ne donne pas plus d'infos que l'immuno qui donne juste la structure.  [...]

Protocole de marquage pour microscopie confocale

Bonjour, je vous sollicite pour un petit souci concernant un protocole que je dois préparer. Je m'explique, mon prof m'a demandé de réalisé un protocole pour faire des lames pour aller les voir en microscopie confocale.  [...] A ce stade je verrais si il y'a colocalisation dans le cytoplasme et si c'est le cas je refais la même expérience que la précédente en remplaçant le marqueur cytoplasmique par le marqueur des vésicules et je verrais donc si il y'a colocalisation dans les vésicules.  [...]

[Biologie Cellulaire] recherche recette de Loading Buffer et Protocols de RT-PCR semi quantitative

-Je suis à la recherche d'une recette de LOADING Buffer, j'en ai trouvé une sur protocol online, mais la quantitée de glycérol me parait un peu élevée.  [...] - Dans mon labo, Nous utilisons pour les Semi-quantitativ RT-PCR, le marquage classique avec l' Ethydium Bromide avec, après une petite photo une analyse tout aussi classique. mais j'aimerais peut etre passer à la fluorescence (Style FAM ou autres..) pour augmenter la précision.  [...]

[Biologie Cellulaire] isolation des mitochondries

Le marquage anti-Hsp60 se fait par immunofluorescence. Dans mon protocole, j'utilises un anticorps monoclonal anti-Hsp60 (Santa Cruz Biotechnology). Le protocole non détaillé.  [...] Dans mon protocole, pour l'étape 2 (après s'être débarassé du premier culot contenant les débris cellulaires et noyaux), ils centrifugent à 15000g pdt 5min. Tu récupères ainsi les mitochondries, les peroxysomes et les lysosomes. Ensuite, à toi de jouer pour isoler les mitochondries en utilisant par exemple un marquage immunofluorescent.  [...]

[Divers] Polyurie chez un chat

Il me semble cependant qu'il est plus classique de voir un mâle uriner un peu partout plutot qu'une femelle. Histoire de marquage de territoire plus fréquent, surtout si tu as ce chat depuis peu.  [...] Ca va des choses bénignes et fréquentes à graves et rares. Donc on n'établit pas un diagnostic de polyurie sur quelques hypothèses mais sur des examens assez précis. Notamment pour faire le différentiel d'avec un marquage classique puisque la castration n'est pas un gage de sécurité de ce côté là.  [...]

coloration de Gram et glycogène

s'il nous prenait l'envie de tenter le protocole d'une coloration de gram sur un muscle/une coupe de foie, aurait-on une chance de voir un marquage spécifique du glycogène.  [...] Chez les autres (bactéries à Gram négatif), les peptidoglycanes sont moins nombreux et couverts par une membrane externe composée de lipopolysaccharides qui retiennent un colorant rouge.   [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de detection de ma protéine par immunofluorescence

Avant de continuer inutilement mes manips avec mon vecteur je souhaiterai vérifier que mon protocole de marquage est correct mais je ne dispose d'aucun plasmide vide avec le tag V5...==. pas moyen de faire des controles.  [...] J'ai une question un peu bête mais as-tu vérifié que ta protéine de fusion NS3-V5 est bien exprimée dans tes cellules après transfection avec un simple SDS-PAGE Je n'ai jamais fait d'expression en cellules eucaryotes mais je suppose que c'est un peu comme pour les bactéries.   [...]