• Santé - Protocole, Kit, Plasmide

clonage qui ne fonctionne pas ? ratio ?

Voici brievement le protocole, digestion du plasmide par une enzyme qui génere des extrémités cohésives (pacI), puis purification des deux fragments à partir d'un gel d'agarose QIAEXII.  [...] C'est le protocole que j'ai suivit digestion du vecteur, purification du backbone (plasmide sans insert) et de l'insert (kit QIAEXII) j'ai ensuite déphosphorylé le plasmide.  [...]

extraction de gel

je dois faire une extraction d un plasmide qui a migre sur gel d agarose donc je dois faire une extraction sur gel est ce que auelau un peut il m expliquer le concept je dois utiliser le kit de biolabs de monarch.  [...] oui j ai lu le protocole du kit et tout mais se que je veux savoir c est l utilite de re extraire le plasmide sur gel comme on la extre et digere deja.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification et purification de plasmide

- Et enfin que feriez-vous si après avoir commandé des milieux, antibios et kit neufs vous n'obteniez que 25 µg de plasmide au lieu de 250 µg comme le dit le protocole du kit de purif (Pureyield midiprep de Promega).  [...] J'ai fais un test de purif en combinant les réactifs du kit et une extraction au phénol chloroforme sur 1.5ml de précultures que j'avais gardées et j'ai obtenu de 20 à 80 µg de plasmides. Visiblement mon problème venait de la purif, les colonnes ont peut-être été saturées par trop de bactéries.  [...]

[Biologie Moléculaire] protocole extraction ARN (pas de kit, ni trizol)

[Biologie Moléculaire] protocole extraction ARN (pas de kit, ni trizol).  [...] Dans le molecular cloning, il y a un protocole pour des extractions d'ARN a base de thiocyanate de guanidine et phénol. Un genre de trizol maison quoi.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ADN Plasmodium

Je suis doctorant en parasitologie, une partie de mon travail repose sur la PCR de plasmodium. Le problème c'est que j'ai pas trouvé dans la bibliographie un protocole d'extraction d'ADN parasitaire depuis le sang total, j'ai trouvé seulement des méthodes utilisant des kit d'extraction tel que QUIgen.  [...] extraction de l'ADN totatal par l'un de ces deux protocole puis ensuite PCR avec des amorces spécifiques de Plasmodium, ca devrait faire l'affaire.  [...]

Dosage protéique par MicroBCA

Tu n'as pas de protocole avec le kit Et sur le site web du revendeur / fabriquant.  [...] je suis étudiant en L2 de bio,,, je recherche un protocole de microBCA,,car je dois preparer mes manipulations pour un blian expérimentales,, voilà des idées §.  [...]

plasmide pDONR/Zeo

Les flèches avec M13 désignent des régions sur lesquelles s'apparient des amorces qu'ils fournissent peut-être avec le kit et permet de vérifier que le gène est dans le plasmide (PCR, séquence).  [...] Quant à ccdB, il code une protéine poison et, comme CmR, est un marqueur de sélection positive. si ton gène est bien inséré dans le plasmide, au bon endroit et tout, ccdB ne sera plus fonctionnel et en principe seul les clones recombinants (= portent les plasmides ayant incorporé un gène) sont viables.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN

j'ai testé plusieurs protocole d'extraction d'ARN (kit RNeasy, Chang et Al 1993, Reid et Al 2006) mais je n'obtiens pas un grand rendement (200ng/uL et en faisant 8 répliquat par échantillons j'obtiens au mieux 10ug...) Il m'en faudrais bien plus car après je dois synthétiser des cDNA et là il me faut 100 ng minimum d'ARNm.  [...] Au début du protocole de chang et Al, on doit incuber 10-15 min à 65°C, peut etre faut -il incuber plus longtemps, 30-45min (je reste sur ce protocole car kit presque épuisé, et protocole de la vigne= Reid et Al =contamination ADN avec un traitement à la DNAse...).  [...]

[Biologie Moléculaire] Mutagénèse dirigée

Dans ce kit le contrôle positif de la mutagénèse utilise un plasmide Whitescript de 4,5 kb. Après la mutagénèse et la digestion des produits par l'enzyme Dpn1, je fait un gel de 0,8% agarose pour vérifier avant la transformation si ma mutagénèse à marché.  [...] ...Seulement là j'ai un petit soucis parce que dans mon contrôle (plasmide whitescript) et dans mon echantillon, tout ce que je dépose sur mon gel reste dans le puit...(je dépose 5µl de produit de PCR).  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification infructueuse

Pour le kit PCR c'en est un nouveau, ils m'avaient refilé dans un premier temps un vieux kit pollué, ducoup il m'en ont filé un tout neuf après, donc pour ca je peux rien dire, s'il y a un pribleme coté PCR c'est soit au niveau des primers, soit de mon protocole.  [...] Oui je suis assez d'accord TanguyE, j'essai de réunir quelques éléments pour le faire changer d'avis en ce moment concernant l'utilisation d'un autre protocole, mais comme il est super confiant envers son kit, j'attend d'avoir plus a lui montrer pour lui montrer que c'est pas une lubie, qu'il y a bien un probleme pour cet organisme avec ce kit. ^^.  [...]