• Santé - Protocole, Fixation, Cellules

[Biologie Cellulaire] Conservation cellules fixées

Bonjour, Je ne sais pas quel est ton protocole de fixation mais moi je garde mes cellules fixées dans 70% EtOH dans PBS jusqu'à plusieurs jours à 4°C.  [...] D'habitude ici on suit les instructions fournies avec le produit, c'est à dire que les cellules sont fixées dans du méthanol pur et conservées à -20 °C pour 30 min ou pour la nuit, suivant les disponibilités du FACS, mais personne n'a encore essayé de les garder plus longtemps.  [...]

[Immunologie] Méthanol et marquage extracellulaire

j'essaye de faire un marquage intracellulaire de phospho Stat5sur des cellules T (souris). Le protocole implique le marquage extracellulaire classique (marqueur CD4, CD25), la phase de fixation puis perméabilisation utilisant PFA et méthanol.  [...] Mais en utilisant le méthanol, je perds tous mes marquages extracellulaires.  [...]

[Biologie Cellulaire] Fixation de la Mcherry

je souhaite fixer des cellules musculaires exprimant la protéine fluorescente MCherry dans l'ensemble de la cellule (noyau + cytoplasme). Cependant, j'ai utilisé le même protocole que pour la fixation de cellules exprimant la GFP (fixation par le PAF à 4%).  [...] Après fixation, j'ai pu observer que la MCherry avait été dégradée. Connaissez vous d'autres fixateurs compatibles avec la MCherry.  [...]

[Biochimie] Marquage cycle cellulaire et FACS

Je me demande quel controle positif utiliser pour faire ma compensation, j'entends un controle autre que mes cellules qui ne seront peut-etre pas assez marquees.  [...] il ya des réglages particuliers à faire. Le marquage lui meme est un peu particulier (fixation/perméabilisation à l'ethanol notamment). La lecture se fait en utilisant FL2A, H et W. Tu peux me demander le protocole par MP si tu veux. Enfin, tes cellules seront marquées ne t'inquiète pas.  [...]

[Immunologie] Fixation pour immonofluorescence

Par contre ils restent visibles dans les cellules transfectées avec les plasmides contenant mes gènes d'intérets. J'ai peur que les méthodes de fixations utilisées n'entrainent une relocalisation cellulaire de mes protéines.  [...] Connaissez vous un protocole de fixation permettant de visualiser la GFP et l'YFP et n'induisant pas de relocalisation cellulaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Fixation au Zinc

salut, j'ai une question. quel type de fixation tu as demandé fixation des cellules sur un Bio-support à la présence de zinc ou l'adjonction entre ces cellules à la présence de zinc.  [...] Désolé je n'ai pris ta question que dans le sens de la fixation des cellules sur un support et non à leur fixation telle qu'on l'entend habituellement (figer les cellules)... Je n'ai aucune hypothèse pour ce cas.  [...]

Cyanobacterie : pluri ou unicellularité ?

Juste un dernier détail concernant les hétérocyste et la fixation de l'azote... Ok la fixation de l'azote ne peux se faire en présence d'O2. Mais j'ai pu lire que les hétérocystes s'occupé de la respiration cellulaire (et non de la photosynthese qui est faite par les autres cellules).  [...] Mais j'ai pu lire que les hétérocystes s'occupé de la respiration cellulaire (et non de la photosynthese qui est faite par les autres cellules). Mais avec une paroi très epaisse comme tu me l'apprend, et la fixation d'O2 pour la respiration, la fixation de l'azote moléculaire peut se faire quand même.  [...]

[Biologie Cellulaire] /[biochimie] demande de conseils pour la fixation de cellules

Mon problème est que je n'ai pas de marquage spécifique ni en fixation PFA ni en fixation méthanol. J'ai tenté de faire des perméabilisations TritonX100 0,1% ou 2%. ou SDS 0,1% ou 0,5% ( sur chaque mode de fixation)...rien mis à part un bruit de fond faible sur l'ensemble des cellules.  [...] Je viens de tomber dans la littérature sur un papier dans lequel ils observent la même protéine que moi. Ils le font sur des coupes de tissus en cryostat, fixées en éthanol 100% 4°C 30min puis acétone -20°C 3min puis ils font sécher la coupe et la réhydrate avec du PBS. Enfin ils perméabilise en TX100 0,2%.   [...]

[Biologie végétale] "Symbiose" rhizobium/Fabacées : vers un résumé des transferts d'azotes

* stade précoce. colonisation de la rhizosphère, fixation des rhizobiums aux cellules épidermiques et aux poils absorbants.  [...] * déversement des bactéries du cordon d'infection et différenciation de cellules spécialisées dans la fixation de l'azote.  [...]

[Biologie Cellulaire] PFA fixation

Encore une fois j'ai besoin de votre aide...Je voudrais savoir ce que fait la PFA dans les cellules pour la fixation. En fait, je suis entrain de tester l'éfficacité de transduction de l'AAV8-GFP dans mes cellules en régardant l'expression de la GFP à 24h et 72h.  [...] N.B. J'avais fait 3 lavages après fixation à la PFA...Normalement après fixation on en censé stockée nos plaques à 4°c pour faire les IF après mais cette fois ci...étant donné que les deux points se trouvaient dans la même plaque et donc j'ai été obligé de remettre la plque à 37°c sans retirer les lamelles des cellules pour le point 24h.  [...]