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denaturalisation protéines

L'urée est surtout utilise pour solubiliser les protéines. Certaines protéines forment des corps d'inclusion (aggrégation de protéines) lorsqu'elles sont surexprimées, si on veut les purifier on les solubilisent en ajoutant de l'urée ou du chlorure de guanidium.  [...] Dénaturer les protéines est également utile lorsqu'on fait un western blot. la migration dépendra uniquement de la masse moléculaire, et non du repliement dans l'espace.  [...]

western

je souhaite savoir quel controle est habituellement utilisé lorsque l on souhaite effectuer un western sur des proteines nucleaires.  [...] J'ai pour cela augmenté la concentration de mon gel de separation (jusque 15% ce qui correspond à une protéine de 28Kd). Cependant certaines bandes non spécifiques restent trop larges (en hauteur) et empechent une bonne visualisation de ma bande d'interet.  [...]

Définition | Western blot - Immunoblot | Futura Santé

Image d'une membrane de western blot. Les bandes foncées correspondent aux protéines qui ont interagi avec les anticorps marqués utilisés. JWSchmidt, Wikimedia Commons, cc by sa 3.0.  [...] Les western blots sont largement utilisés dans les laboratoires de recherche qui s'intéressent aux rôles des protéines. Dans le domaine médical, elles sont utilisées dans le diagnostic de certaines maladies. Les tests VIH de confirmation utilisent cette technologie pour détecter un anticorps anti-VIH dans un échantillon de sérum.  [...]

[Biochimie] Comment optimiser le transfert (en western blot) des protéines de haut poids moléculaire ?

Je cherche le moyen d'optimiser le transfert (en western blot) des protéines de haut poids moléculaire. Je travaille sur FAS (274kDa) et je n'arrive pas à la transférer.  [...] Il n'y a pas de tampon de transfert étant donné que c'est un transfert à sec. Une fois que ton gel a migré, tu utilises un appareil spécial pour cela et en quelques minutes, c'est transféré. Ca revient un peu plus cher que la méthode classique (7 à 8 euros par transfert de mémoire) mais pour les grosses protéines ça marche largement mieux.  [...]

[Biologie Moléculaire] western blot "semi-quantitatif", pourquoi??

J'utilise la technique du western blot afin de quantifier mes protéines d'intérêt (par chemiluminescence, révélation par l'ECL+ et analyseur d'image permettant de quantifier mes blots), mais une question se pose à moi. pourquoi dit-on du western blot que c'est une technique semi-quantitative Quelles sont les limites de la quantification.  [...] Il est possible en western blot d'observer des variations de quantité de protéines, mais il faut être prudent pour éviter les biais méthodologiques. par exemple quand j'en faisais, j'utilisais comme référence la quantification d'un de mes échantillons, le même tout au long de la manip, je déposais chaque échantillon en double avec 2 concentrations différentes (ce qui me permettait de vérifier la proportionnalité entre mes 2 dépôts.  [...]

Réactifs de biomol

Une autre petite question, on ajoute du PBS 1x à 4 degré celsius pour l'extraction des protéines... Ca agit comment et ca sert précisément à quoi.  [...] Sinon le PBS est souvent utilisé pour des prép' de protéines (western blot etc) à 4 degré ca minimise la désactivation des protéines (par perte de conformation) et également la protéolyse (même s'il existe des inhibiteurs de protéases sur le marché...).  [...]

[Biochimie] GST pulldown

en gros l'étiquette GST permet de purifier les protéines étiquetées en utilisant des billes sur lesquelles se fixent l'étiquette. Apres avoir récupéré tes protéines, tu peux les déposer sur un gel d'acrylamide et faire un western blot avec par exemple un anticorps anti-HA.  [...] Les deux méthodes ont leurs avantages et inconvéninents. le tag myc est très petit (environ 1 kDa), par contre son utilisation est couteuse car il doit être reconnu par un anticorps. A l'inverse, le tag GST est une vraie protéine d'environ 26 kDa, dimérique (ça peut avoir des conséquences sur la cible), mais bien plus simple et moins couteuse a utiliser (l'élution se fait par le glutathion).  [...]

[Biologie Cellulaire] Contrôler la pureté des protéines

Puis pour verifier la purete je ferais sur un gel d un cote une coloration au bleu de coomassie qui va colorer toute tes proteines et de l'autre un western blot avec des anticorps diriges contre la proteine que tu veux.. puis tu compare les 2 gels.  [...] Comparer un gel au bleu de Coomacie avec un western me parait être une bonne idée mais est-on sur que dans l'extrait protéique il n'y aura que la protéine que l'on veut étudier Si on utilise un anticorps contre notre protéine d'intérêt on ne verra qu'elle mais cela ne veux pas dire qu'il n'y a pas d'autres protéines que l'on ne voit pas.  [...]

[Biologie Cellulaire] Controle pour Western blot

Je souhaite faire un western blot sur un extrait de protéines nucléaires mais je ne trouve pas de protéine à utiliser comme controle. Auriez-vous une idée de la protéine généralement utilisées pour cela.  [...] histone H3 me semble pas mal (sauf si vous testez des cellules avec justement l'insertion d'isoformes spécifiques des histones. par exemple et principalement le testicule).   [...]

[Biochimie] Cherche matériel scientifique intéressant pr exposé!

Je pourrais te proposer autrement le biacore (résonance plasmonique de surface), pas mal pour étudier l'interaction entre deux protéines et les techniques d'immunologie (coimmunoprécipitation, western blot etc.), très très utilisées dans les labos (malgré le prix des anticorps ).  [...] -Le moins complexe. les techniques d'immunoprécipitation et coimmunoprécipitation. Beaucoup d'autres techniques d'immunologie comme le test ELISA ou l'immunofluorescence sont extrêmement simples à comprendre (c'est toujours le même principe de fixation d'un Anticorps spécifique sur une protéine).  [...]