• Santé - Protéines, Tampon, BSA

[Biochimie] Role de la BSA dans une extraction protéique ??

Mais lorsque je dose ensuite mes protéines extraites, la BSA est utilisée dans la gamme étalon. Dans quelle mesure la BSA présente dans mes extraits (puisque dans le tampon d'extraction) ne va pas fausser la quantification des proteines extraites par la suite.  [...] Et un dosage des protéines extraites avec un Bradford modifié (RC DC biorad) à 750 pour pouvoir exprimer mes activités par quantité de prot extraites.  [...]

[Biologie Cellulaire] Problème dosage microBCA

Je souhaite réaliser un dosage de protéines sur lysat cellulaire avec la méthode microBCA. Les cellules sont lysées avec du tampon RIPA (Tris 50mM, NaCl 150mM, SDS 0.1%, Sodium deoxycholate 0.5%, Triton X100 1%). J'ai d'abord fait un test en réalisant des gammes étalons de BSA diluée dans différentes solutions (RIPA, RIPA dilué au 1/3 dans de l'eau distillée, eau distillée).  [...] En fait le problème que j'ai ce n'est pas que le tampon seul interagit de façon excessive avec le réactif (le blanc n'est pas limpide mais ça reste très acceptable), c'est simplement qu'en présence de protéines même à de fortes concentrations par rapport à ce que préconise la notice du kit, je n'obtient pas la coloration escomptée quand j'ajoute le réactif si la gamme a été faite dans du RIPA.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique du Western Blot

Complément à mon message d'au dessus, je me rends compte qu'il est plus qu'incomplet. la membrane de nitrocellulose sur laquelle tu as transféré tes protéines est faite pour accrocher toutes les protéines de manière non spécifique, donc si tu incube tes anticorps sans avoir fait au préalable d'étape de blocage ils vont se fixer partout.  [...] C'est pour ca que pour bloquer la membrane on utilise une solution très riche en protéine (BSA, ou tout simplement du lait dilué dans ton tampon de marquage).  [...]

[Biochimie] Caractéristiques des tampons utilisés en ELISA

Après l'étape de saturation du puits, on ajoute l'anticorps secondaire portant un marqueur de révélation. On ajoute également du Tween 20 et de la BSA dans le tampon véronal où celui ci est dilué.  [...] Le Tween 20 est un détergent qu'on utilise généralement pour limiter les fixations non spécifiques. Seulement voila, dans une série de manip', j'ai dilué mon anticorps secondaire dans du tampon véronal pur (càd sans BSA, ni tween). A ma grande surprise, je n'ai eu AUCUN signal dans tous les cas (donc, aucune fixation de mon anticorps secondaire Pourquoi ).  [...]

[Biochimie] Principe et manipulations générales pour le test ELISA indirect

Bonjour à tous, moi et mon équipe de classe devons réaliser un protocole ELISA indirect à partir d'un article en anglais que le prof nous a fourni et la matière sur cette technique n'a pas encore été vu en classe. Je comprends bien le principe de base du test ELISA mais mon questionnement est davantage d'aspect pratique.   [...] Premièrement, j'ajoute que nous avons 2 types d'anticorps, Goat profilin polyclonal antibody et rabbit anti-goat IgG alkaline phosphatase conjugated, le tampon de lavage est du PBST et celui pour sceller les puits (to block) est du 5% BSA dans du TBST et le substrat du pNPP.  [...]

Protéines et Mousse

Voila, le sujet a deja été largement parcouru en ce qui concerne les protéines animales types BSA (albumine d'origine bovine), CSA (caseine), WPI (whey protein), SPI (protéines de soja).  [...] Ms c une méthode deja utilisée en labo, parce que la j ai l impression que tu vas jouer sur les parametres, mais sais tu quelles protéines tu vas recuperer au final.  [...]

Problème lors de ligation

Je précise que j'ai vérifié qu'il n'y avais pas de conta dans la BSA ou le tampon on l'enzyme en réalisant un digestion sur un autre vecteur ou cela fonctionne.  [...] Quelle enzyme utilises tu pour déphosphoryler (la déphosphorylation n'est pas toujours complète et certaines enzymes peuvent abimer l'ADN).   [...]

[Biologie Moléculaire] Mise en évidence d'interaction entre molécules

J'ai eu un cours sur les ARN circulant et le transport cellules à cellules. Pour démontrer qu'il existait une interaction entre des protéines du plasmodesmes et les dits ARN circulant, il nous a montré des photos de gel (enfin je pense que s'en est) cf fichier joint.  [...] dans la première colonne. un gel de SDS-PAGE coloré avec du bleu de Coomassie sur lequel on voit toutes les protéines présentes dans chaque fraction (les 14 fractions ayant été obtenues par FPLC),  [...]

[Biochimie] Migration Western Blot - Page 2

Sinon prends les solutions de ta collegue qui n'a pas de probleme pour faire tes gels et regarde ce que ca donne. Si c'est toujours moche alors ca viens de tes échantillons qui sont peut etre trop salins.   [...] Pour les sels je vois pas d'ou ils peuvent venir car même avec de la BSA purifiée j'ai le soucis ainsi qu'avec des culots de cellules repris dans du tampon d'échantillon.  [...]

[Biochimie] Bsa

Elle est facile à se procurer (extraite du sérum de veau) elle est abondante et hydrosoluble. Son abondance en fait une protéine peu coûteuse. Voilà déjà quelques arguments.  [...] La BSA est un produit complexe pouvant contenir d'autres protéines, protéases et DNases. La complexité vient dans le fait d'avoir de la BSA relativement propre. De la BSA crude non pure est simple et peu cher.  [...]