• Santé - Protéines, Solution, Tampon

[Biochimie] Protéines solubles

Les protéines intrinsèques sont situées à l'intérieur de la membrane cellulaire. Elles ont pour fonction d'assurer le transport des nutriments ou des signaux de part et d'autre de la membrane cellulaire. Il peut s'agir de canaux transmembranaires qui assurent l'entrée et la sortie d'électrolytes, de molécules d'eau, glucose, etc.  [...] Protéine soluble. Ancienne mesure de laboratoire qui représente la fraction des protéines brutes qui se dissolvent quand elles sont mélangées à une solution tampon. Si 30 % des protéines se dissolvent, par définition, 30 % des protéines brutes sont solubles.  [...]

[Génétique] Extraction d'ADN plasmidique de bactéries

Bonjour, alors voila j'ai fait un TP sur l'extraction d'ADN et pour faire mon compte rendu j'ai un petit soucis, le spectrophotomètre indique que ma solution a.  [...] J'ai la présence de composés aromatiques et de très peu d'éthanol dans ma solution, mais je me demande comment j'ai pu contaminer ma solution, est ce du au tampon que j'ai utilisé pour solubiliser et dénaturer les protéines.  [...]

[Biochimie] Chromatographie échangeuse d'anions avec salting-out

L'énoncé est le suivant. Une solution renfermant les protéines suivantes, albumine (pI = 4,6), uréase (pI=5,1) et myoglobine (pI=7,5) est déposée sur une colonne d'échangeuse d'anions à pH = 6,5. La colonne est lavée avec un tampon pH 6,5 renfermant des quantités croissantes de NaCl.  [...] Ma réflexion. la myoglobine est la seule à être chargée +, donc elle n'est pas retenue. Les deux autres vont être retenues car chargées -, mais forcément avec des temps de rétention différents. Est-ce que l'albumine restera plus longtemps retenue car son pI est encore plus en-dessous du pH 6,5 que celui de l'uréase Au début je me suis dit que peut-être ça a avoir avec la solubilité des protéines (salting-out), mais on n'a pas vu de moyen pour connaître à partir du pI l'ordre de précipitation de peptides en solution saline croissante.  [...]

[Biologie Moléculaire] Cross-linking

Petite précision. en fait, le PBS est un tampon, mais il contient deja environ 150mM de sel, donc ce n'est pas juste de l'eau tamponnée. Les protéines seront donc stables dans une simple solution de PBS.  [...] Pour le Tris, c'est un tampon, mais à la différence du PBS, il n'y pas pas de sel. Donc il faut penser à en rajouter à ta manip pour ne pas dénaturer les protéines. Le tampon tris est utilisé en remplacement du PBS dans les manip ou la présence de tampon phosphate est inhibitrice (par exemple pour des kinations).  [...]

[Biochimie] pH protéines hydrosolubles animales

Le pH des protéines hydrosolubles n'a pas d'importance dans la solubilisation des protéines. Il faut simplement être dans un tampon permettant de maintenir les protéines en solution.  [...] Comment pourrai-je vérifier que les protéines d'intérêt sont bel et bien dans ma solution Par un dosage par la méthode de Bradford par exemple.  [...]

[Identification] IPG strip gel combiner a une extraction au PBS

Je me suis renseigner dans le labo et apparement les problemes rencontres proviendrait d'un extrait proteique contaminer par des solutions utiliser pendant l'extraction classique au PBS.  [...] L'extraction classique utilise un tampon phosphate pour le broyage initial, je doute que cela soit ca du fait des lavages, ensuite les proteines sont precipites avec du TCA, laver avec de l'ethanol et remis en solution avec un tampon dont je n'ai pas la composition sous le coude (je suis en stage donc je ne connais pas encore toute les solutions exactement).  [...]

[Biologie Moléculaire] Mesure de pureté d'une préparation d'ADN aberrante?

L'ADN est issu d'un broyat de foie de rat, il a été purifié par une exctraction phénolique, une précipitation dans de l'éthanol absolu et une resolubilisation dans un tampon d'élution TrisHCL 10mM + EDTA 1 mM à pH 8.  [...] J'avais pensé à une contamination par autre chose que des protéines, mais je vois mal ce qui a pu contaminer en absorbant à 260 pile, et ni à 280 ni à 320. Et surtout qu'est-ce qui peut contaminer mon ADN, à part des protéines Des restes de la lyse des hépatocytes Un truc de la solution tampon.  [...]

[Biochimie] Protocole de purification d'une protéine, vos avis

on réalise l'élution Elution des protéines non retenues par le support avec une solution tampon phosphate (on m'a parlé de pH décroissant ).  [...] Je ne connais pas ma quantité de protéine dois-je réaliser une gamme étalon pour déterminer les quantité de protéines de mes solutions.  [...]

proteinesdans le culot ou le surnageant

Si votre tampon initial ne contient que du tris, en principe certaines des protéines seront solubles, d'autres pas et se retrouveront donc dans le culot. Une protéine soluble n'a malheureusement aucune raison de précipiter si elle est en solution, même a haute vitesse.  [...] Si le protocole est connu et décrit, j'imagine qu'on peut considérer que les protéines sont au fond. Si c'est un nouveau protocole, c'est à vérifier, mais d'apres les infos il n'y a pas de raison que le culot contienne toutes les protéines de l'extrait.  [...]

[Biochimie] Protocole de TP un peu flou

J'ai un tp de biochimie la semaine prochaine,je suis en train de le preparer j'ai compris le but qui est de tracer des spectres d'absorption de 3 acides aminés pour etablir leur coefficient.   [...] Dans le protocole on nous demande de préparer les solutions d'acide aminés suivantes.  [...]