• Santé - Protéines, Protocole, Cellules

[Biochimie] Protocole fractionnement : isoler le cytoplasme et le noyau

Afin de montrer la localisation préférentielle d'une protéine (noyau / cyto) dans différentes conditions et avec différents mutant de cette protéine, je recherche un protocole permettant de séparer le cytoplasme de la fraction nucléaire. Puis, je visualiserai les niveaux de la protéines en WB.  [...] jai besoin d isoler les proteines cytoplasmiques de celles nucleaires est ce que votre protocole marche avec les cellules en suspension.  [...]

[Biochimie] Interaction protéine/protéine - ultrasons

Donc je dois faire d'autres homogénats à partir de tissu congelé à -20°C, car ceux avec le SDS me serviront à autre chose (je voulais savoir si ça pouvait faire double-emploi.)... Aurais-tu une idée de protocole d'IPP pour étudier l'interaction entre 2 protéines membranaires En effet, je trouve pas mal de choses pour des cultures de cellules, mais à pas à partir de tissu animal.  [...] d'abord le cerveau est plongé dans l'azote liquide, et ensuite isopentane pendant 10 sec avant de le conserver à -80°C... D'ailleurs pendant que j'y suis, penses-tu que ce protocole peut abîmer les membranes nucléaires, ce qui pourrait contaminer les protéines du cytosol par des protéines nucléaires ou inversement En effet, je vais aussi faire un fractionnement subcellulaire avec un tampon sucrose EGTA MgCl2, inhib proteases.  [...]

[Biologie Cellulaire] Extraction protéique pour western blot

Je cultive les cellules sur boite (comme ce sont des cellules adhérentes), le protocole est donné pour extraire les protéines de cellules sur une boite de 6cm de diamètre.  [...] Je peux comprendre ça mais le problème est que lorsque tu débutes le dosage peut devenir inutile (s'il ne l'était pas déjà comme c'est le cas ici) de part l'imprécision du pipetage (dû au fait que tu débutes justement)... Et je n'ai jamais dosé mes protéines pour un extrait cellulaire total, jamais eu de problème non plus.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot sur des echantillons de foie murins

Merci pour les protocoles. C'est tres gentil. Mais pour les lysats, je ne parlais pas de cellules en culture, mais de fragment d'organes. Il s agit du foie de souris. As tu un protocole.  [...] oui, je me ferai aider. Mais avant j ai quand meme besoin d un protocole.Le probleme c'est que je pars de rien. Dans le labo, ils ont dosè d autres proteines, pas celles la. De plus, ils le font souvent sur des cellules en culture. Cest pour cela que je suis un peu perdue. J'attens ton message demain.  [...]

[Biologie Cellulaire] Fixation de la Mcherry

je souhaite fixer des cellules musculaires exprimant la protéine fluorescente MCherry dans l'ensemble de la cellule (noyau + cytoplasme). Cependant, j'ai utilisé le même protocole que pour la fixation de cellules exprimant la GFP (fixation par le PAF à 4%).  [...] Après fixation, j'ai pu observer que la MCherry avait été dégradée. Connaissez vous d'autres fixateurs compatibles avec la MCherry.   [...]

[Biologie Moléculaire] Western sur protéine membranaire

Je fais tous mes western sur une protéine membranaire (mais de cellules humaines et pas de levure) en Laemli (je n'ai jamais su l'écrire) ou d'autres tampons style Guanidium, urée, RIPA,... Ca ne marche pas le Laemli chez la levure Est ce que tu as essayé de casser au dounce.  [...] J'avais prévu d'utiliser le TCA j'ai un protocole qui marche tres bien pour les protéines cytoplasmiques. Je vais faire le laemli en parallele et on verra bien ce que ca donne.  [...]

[Biologie moléculaire] Protocole électroporation cellules mammifères

[Biologie moléculaire] Protocole électroporation cellules mammifères.  [...] Je suis à la recherche d'un protocole efficace d'électroporation de cellules de mammifères (plus particulièrement des cellules de type murine C2C12).  [...]

[Biochimie] Dégradation de protéines dans l'urée 8M

J'ai un petit problème dans une des mes expériences. Je produits des protéines dans des E. coli en corps d'inclusion. J'effectue un protocole de récupération de ces corps d'inclusion assez long mais efficace (pour l'avoir testé sur deux autres protéines).  [...] Ce protocole consiste à disrupter les cellules puis à solubiliser les membranes dans du triton x-100 une nuit, puis solubiliser les corps d'inclusion dans de l'urée 8 M.  [...]

[Biochimie] dot plot et overlay

J'ai cherché un protocole pour faire cette technique cependant je n'ai pas trouvé un protocole complet qui comporte le dot plot et l'overlay surtout que ceux qui font l'overlay commence par faire un western blot alors que moi j'évite de le faire pour ne pas dénaturer mes protéines.  [...] Pourriez vous m'aider à retrouver un protocole complet sur l'overlay et la concentration de protéines que je dois déposer.  [...]

[Biotechnologie] Protocole d'extraction des proteines totales

[Biotechnologie] Protocole d'extraction des proteines totales.  [...] salut, je suis un jeune chercheur tunisien, bref, je cherche un article scientifique contient un protocole d'extraction des proteines totales de tissu vegetales( ex. palmier dattier), tenir compte que je veux faire une electrophorese monodimensionelle, SVP c trooooooop urgent si il ya plus d'articles priere les envoyez-moi sur email.  [...]