• Santé - Protéines, Membrane, Interactions

Définition | Western blot - Immunoblot | Futura Santé

des échantillons protéiques sont déposés sur un gel d'électrophorèse et sont séparés en fonction de leur poids moléculaire. Pour cela, un courant électrique est appliqué dans le gel. Plus les protéines ont une taille importante, moins elles migrent vite.  [...] une fois que les protéines ont migré, elles sont transférées sur une membrane qui peut être composée de nitrocellulose ou de polyfluorure de vinylidène (PVDF). La fixation des protéines à la membrane se fait grâce à des interactions hydrophobes et ioniques entre la membrane et les protéines.  [...]

[Biologie Moléculaire] Expliquer le Blocking buffer

c'est plutôt sur les protéines endogènes que le bloquant se place. Simplement en se mettant un peu partout, là ou il y a interaction, mais de façon non spécifique.  [...] En saturant la membrane avec des protéines non spécifiques, il y a moins d'AC qui va s'y fixer car les interactions protéine/membrane non spécifiques doivent être plus fréquentes que les interactions protéine/protéine non spécifiques.  [...]

[Génétique] Adn

Le méthanol permet de dissocier le SDS des protéines afin que celles-ci puisse se fixer sur la membrane grâce à des interactions hydrophobes non permises par le SDS collé aux protéines.  [...] L'extraction des protéines (ou des acides nucléiques, ça repose sur le même principe) nécessite le phénol puis le chloforme mélangé avec un peu d'alcool isoamylique. Cela permet de séparer les protéines des acides nucléiques, ceux ci n'étant pas soluble dans le phénol ou chloroforme.  [...]

[Biologie Cellulaire] protéins extrinsèques et intrinsèques

Pour faire simple, les protéines intrinsèques ont des interactions fortes avec le milieu hydrophobe membranaire. Ces protéines sont le plus souvent transmembranaires, c'est-à-dire qu'elles exposent une région de la molécule au milieu cellulaire interne et une région au milieu externe.  [...] Ces protéines transmembranaires peuvent avoir un ou plusieurs passages au travers de la membrane (ces passages étant constitués d'hélices alpha) et sont généralement adaptées à la transmission de signaux. Les protéines extrinsèques, elles, n'ont peu ou pas d'interactions avec le coeur hydrophobe de la membrane.  [...]

[Biochimie] Questions Coomassie et Western Blot

Le méthanol et l'éthanol rendent le gel plus poreux, ce qui permet de faciliter les échanges avec le tampon (que ce soit de transfert ou de staining en coomassie). Cela permet une meilleure pénétration du coomassie dans le gel pour colorer les protéines, et cela facilite la sortie des protéines du gel pour le transfert.  [...] Pour le transfert, les solvants ont un intérêt beaucoup plus forts car ils permettent la dissociation du SDS des protéines, ce qui permet aux protéines d'interagir avec la membrane de PVDF par interactions hydrophobes et électrostatiques, mais pas ioniques comme l'exigerait une interaction avec le SDS.  [...]

[Biochimie] extraction protéines membranaires à partir de tissu cérébral congelé (pour étude de co-IPP)

Pour effectuer une co-IP sur des protéines membranaires, je pense qu'il vaut mieux opter pour un détergent doux. Le CHAPS est souvent utiliser pour les co-IP car il est très doux. Un détergent trop fort dénature les protéines et les interactions entre les protéines sont très sensibles à la structure 3D.  [...] J'ai trouvé ce détergent. N-dodecyl-ß-D-maltoside, savez-vous s'il conserve les interactions entre deux prot membranaires (récepteur canal + protéine régulatrice) Car j'ai malheureusement lu que le CHAPS casse les interactions entre les protéines membranaires, donc ce n'est pas bon pour moi ( Useful for solubilizing membrane proteins and breaking protein-protein interactions ).  [...]

[Biochimie] dot plot et overlay

Dans le but d'étudier les interactions entre 2 protéines, je voudrais faire un dot plot pour immobiliser ma première protéine sur la membrane de nitrocellulose, par la suite je voudrais faire un overlay ou j'incube ma membrane de nitrocellulose dans la solution de la deuxième protéine et je révèle les interactions par l'anticorps de la deuxième protéine.  [...] En faite, comme j'en ai que peu des deux protéines je suis obligée de commencer par le dot plot et l'overlay pour voir les interactions possibles et par la suite je passerai a l'IP. J'ignore la quantité exacte de protéines que je dois déposer.  [...]

[Microbiologie] La résistance aux antibiotiques?

Ces protéines sont, pour certaines, homologues à des protéines du cytosquellette et, pour la plupart membranaires. Toutes ces protéines sont recrutées au site de division lors de la septation. Il n'y a que peu de données biochimiques et structurales sur ces molécules, et sur leurs interactions.  [...] Des questions fondamentales quant aux processus de division restent ouvertes. comment ces protéines sont-elles recrutées au site de division dans quel ordre Forment-elles un ou plusieurs complexes stables Quel est le rôle de chacune d'entre-elle Comment sont coordonnées la constriction de la membrane et la synthèse de la paroi au site de division Peut-on interférer avec la division en perturbant la fonction ou les interactions entre ces protéines.  [...]

[Biologie Moléculaire] Immunoprécipitation

Alors ma question c'est, pourquoi on fait l'immunoprécipitation qui est une méthode beaucoup plus longue et où on peut avoir des interférences avec des chaînes légères (peut être parce que seule protéines est présente sur la membrane) et peut être aussi parce que avec une électrophorèse sur les protéines totales il peut y avoir des interactions aspécifiques protéine-anticorps.  [...] Oui d'accord, j'ai compris c'est très utile pour identifier un co-immunoprecipitat (interaction protéine-protéine) et c'est pourquoi le WB est très utile.  [...]

biologie cellulaire

Pas dans la synthèse des protéines, mais dans la structure des protéines. Comme toutes les protéines se replient dans l'espace les aa. hydrophobes vont, globalement, se retrouver au centre de la pelote s'il s'agit d'une protéine globulaire car c'est la régions où les interactions avec les molécules d'eau sont minimum.  [...] Dans le cas particulier des protéines partiellement insérée dans la membrane la disposition est différente car ce sont ces aa. hydrophobes qui vont permettre l'insertion en interagissant avec les lipides membranaires (interactions dites hydrophobes).  [...]