• Santé - Protéines, Fixation, Membrane

Définition | Western blot - Immunoblot | Futura Santé

Un western blot, ou immunoblot, est une méthode de biologie moléculaire qui permet la détection de protéines spécifiques sur une membrane.  [...] une fois que les protéines ont migré, elles sont transférées sur une membrane qui peut être composée de nitrocellulose ou de polyfluorure de vinylidène (PVDF). La fixation des protéines à la membrane se fait grâce à des interactions hydrophobes et ioniques entre la membrane et les protéines.  [...]

[Biochimie] Western blot

Un facteur qui peut également jouer est la balance éthanol/SDS. Le SDS aide tes protéines à sortir du gel mais diminue leur fixation à la membrane. à l'inverse l'éthanol aide à la fixation mais empêche les protéines de sortir du gel. Tu peux donc essayer peut être d'augmenter la quantité de SDS et de baisser un peu l'éthanol.  [...] très intéressante cette discussion. Effectivement, est-ce qu'il serait possible d'avoir la référence de la publication sur l'utilisation du tampon de transfert pour les grosses protéines.  [...]

[Biologie Moléculaire] Membrane plasmique

oui c'est un peu ce que je me disais,est ce que si je dis les protéines de liaison permettent d'arrimer les cellules entre elles ou à la matrice extra-cellulaire.Egalement présentes sur la face intracellulaire,elles relient la membrane au cytosquelette et renforcent ainsi la résistance de la membrane plasmique aux déchirures.  [...] porteuse de messages... je dirais que plutot la fixation spécifique sur ces protéines vont induire un message, mais prend un schéma d'une membrane cellulaire et n'oublie pas tout les composants.-D.  [...]

[Physiologie] Cellule musculaire striée squeletique

C'est ca, stockage du calcium, le Ca étant nécessaire à la contraction il vaut mieux pas en manquer. Après le stocker sous forme libre doit pas être très bon pour le potentiel de la membrane ou pour les autres protéines environnantes, d'où sa fixation sur une protéine.  [...] Parce qu'à l'arrivée d'un Potentiel d'Action musculaire au niveau d'un tubule T, il y a activation d'une protéine membranaire sensible au voltage qui va changer de conformation et tirer mécaniquement sur une protéine de la membrane du RS qui est un canal à Ca2+.  [...]

[Biologie Cellulaire] Protéines et membrane plasmique

Les protéines périphériques peuvent en effet être reliées covalemment à des AG comme le palmitate (palmitoylation) ou le myristate (myristoylation), pour améliorer leur fixation à la surface de la membrane. D'autres modifications post-traductionnelles comme la géranylgéranylation, la farnésylation, ou la glypiation peuvent avoir lieu dans le même but.  [...] Par exemple, le diacylglycérol produit par la phospholipase C permet de recruter à la membrane la protéine kinase C qui va alors être active. Les interacions hydrophobes de ces protéines avec la membrane doit surtout se faire via leur modifications post-traductionnelles (si elles en ont) je pense.  [...]

[Biologie Cellulaire] Lamine coté cytosolique ?

On me dit concernant la structure de l'enveloppe nucléaire, au niveau de la membrane interne se trouve des protéines de fixation tel que les récepteurs des lamines. Les lamines sont un type de filament intermédiaire présent sur la face cytosolique de l'enveloppe nucléaire.  [...] Avec face cytosolique en gras. Or pour moi les lamines sont situé sur la membrane interne face nucléoplasme non Je ne comprends pas pourquoi on parle de face cytosolique.  [...]

[Biologie Cellulaire] Dot blot

On ne sépare pas les protéines et la détection peut s'en trouver altérée (augmentation du bruit de fond notamment). Il n'y a pas d'électro-transfert et de ce fait la fixation des protéines sur la membrane est plus faible. On ne peut pas observer de shift de migration ou des migrations à des poids moléculaires aberrants et il est donc impossible de visualiser les modifications post-traductionnelles en utilisant un anticorps dirigé contre la forme totale.  [...] Je dis que ce n'est pas aussi rigoureux qu'un western parce que les protéines ne sont pas solidement ancrées dans la membrane et si un jour tu as l'occasion de faire un western et un dot-blot en parallèle hybridés avec le même anticorps tu pourrais avoir des surprises comme cela m'est arrivé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Binding tests sur enzyme

Etudiant en master Bio, je recherche des informations sur les tests de binding pour un screening HTS. La cible est une enzyme de l'appareil de Golgi.   [...] Un test de binding sur cellule entière ou sur membrane isolée, c'est des étapes et des étapes (lavage, fixation...), des soucis de reproductibilité avec des lots de cellules qui vont produire plus ou moins de protéines, des soucis de sensibilité avec beaucoup de non-spé lié a l'absorption des molécules aux membranes.  [...]

Perforine : une dangereuse protéine

La perforine, protéine essentielle au système immunitaire, est capable de percer des trous à la surface des cellules pour les tuer. Son mécanisme d'action qui était encore mal compris, vient d'être élucidé grâce aux travaux de deux équipes de recherche.  [...] Les images obtenues permettent d'observer que la perforine est une protéine en forme de clé, composée de plusieurs domaines et que la fixation à la membrane nécessite la présence d'ions calcium. De manière plus surprenante, la microscopie électronique a révélé que l'arrangement des perforines ressemble à celui des protéines bactériennes toxiques pour les cellules humaines ( anthrax, listéria, streptocoque...).  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique du Western Blot

Dans mon cours j'ai noté que lors du transfert sur un filtre de nitrocellulose, il fallait saturer les sites de fixation de l'anticorps.  [...] Le blocage des sites de fixation non spécifique des anticorps aux protéines que tu as transféré sur la membrane peut aussi se faire si nécessaire mais c'est différent.  [...]