• Santé - Protéines, Anticorps, Couple

[Biotechnologie] Cellulase, comment l'extraire rapidement ?

Mais me si tu extrait tes protéines tu auras un mix de toutes tes protéines, et tu ne peux pas faire de purification home-made car il te faudrait soit des colonnes de séparation, soit des anticorps dirigés contre ta protéine et couplé a des billes magnétiques.  [...] Cependant si tu n'as pas besoin de quelque chose de pur, tu peux toujours utiliser l'extrait protéique et simplement le concentrer et tu auras l'activité cellulase dans ton extrait (mais avec d'autres protéines dedans donc d'autres enzymes et d'autres activités aussi, mais si c'est pour digérer des déchets végétaux et obtenir des dérivés glucidique, ca ne devrait pas déranger) par contre tu auras de petites quantités, si tu veux valoriser les déchets végétaux a l'échelle industrielle cela va te poser quelques problèmes.  [...]

[Biologie Cellulaire] La cellule mystère.... - Page 8

Pour la coloration, je dirais anticorps primaire anti-tubuline avec un anticorps secondaire anti-anticorps primaire couplé avec la GFP ( je ne vois que cette coloration faisant un tel vert). Pour l'ADN, bleu de toluidine(je suppose que c'est pas ça, ça serait trop facile.).  [...] La GFP peu probable on l'utilise pour des transfections en protéines de fusion (l'anticorps couplé à la GFP est pas rentable économiquement et techniquement).  [...]

[Biologie Moléculaire] western blot / proteine hrp

Maintenant vous pouvez tout à fait faire un gel non dénaturant sans SDS si vous voulez garder la conformation native des protéines et conserver les complexes, mais cela n'a rien à voir avec l'utilisation ultérieure d'un anticorps couplé à la préoxydase.  [...] En fait ce que je voulais savoir c'est s'il est possible de faire migrer sur gel une proteine couplée à la peroxydase puis de la transferer sur membrane et cela en condition non dénaturante pour que la peroxydase après avoir été blottée puisse encore réagir.  [...]

[Immunologie] Faire divorcer un couple Ag-Ac

Pour le tester, tu prend le fluorophore seul (enfin le couple avec anticorps bien sûr) et tu lui fais subir ces conditions, avec un témoin négatif ne subissant rien du tout. En faisant le comparatif, tu t'apercevras vite si tes conditions de récupération de l'anticorps couplé au fluorophore sont bonnes ou pas.  [...] Tu peux aussi regarder les manips où les auteurs effectuent une purification protéique par chromatogrtaphie d'affinité où la phase stationnaire est constituée de billes couplées à un anticorps dirigé contre la protéine d'intérêt. Généralement, ils utilisent la force ionique pour éluer la protéine.  [...]

[Immunologie] Protocole ELISA

De la même façon, l'anticorps secondaire est une immunoglobine anti-lapin obtenue en injectant des antigènes de lapin dans une chèvre (anticorps disponibles dans le commerce). Cet anticorps secondaire est couplé à une enzyme peroxydas e obtenue chez le radis ou le raifort. test elisa.png.  [...] NB. je ne suis pas expert dans le domaine mais pourquoi avoir choisi trois anticorps Ne pouvait-on pas couplé la peroxydase à l'anticorps anti-loup directement.  [...]

[Biologie Cellulaire] Différence entre l'utilisation d'un fluorophore et d'une molécule fluorescente

...) alors que les non protéiques servent a faire des marquages a postériori, c'est à dire qu'on doit les fixer a la cible d'intérêt par un moyen ou un autre (affinité (ex phalloidine texas red), couplé a un anticorps (par exemple anti actine fluoresceine), marqueur de compartiment cellulaire (exemple mitotracker).  [...] Non je me suis trompée. tout fluorophore = molécule fluorescente que l'on peut utiliser soit dans une cellule fixée donc morte, soit dans une cellule vivante grâce aux plasmides par exemple, et dans ce cas là c'est, en particulier, une protéine fluorscente Et si le fluorophore que l'on utilise n'est pas protéique, quel est l'intérêt de faire de la vidéomicroscopie, puisque la cellule est morte.  [...]

[Biologie Cellulaire] immunofluorescence ???

Ce que j'ai pu comprendre, c'est qu'on utilise le gène ou la protéine ciblée et on forme un anticorps contre celui-ci... mais ce qui émet la fluorescence, le fluorochrome, comment est-ce qu'il est incorporé.  [...] Cet anticorps est lui même reconnu par un anticorps secondaire qui lui est souvent couplé à un fluorophore (c'est simple tu commandes simplement cet anticorps couplé et tu l'utilises).  [...]

[Biologie Cellulaire] Problème marquage Actin par la Phalloidine

Je réalise marquage de ma protéine d'intérêt avec un anticorps primaire, puis un secondaire couplé au fluorophore.  [...] Ensuite je réalise un marquage de l'actin en utilisant de la phalloidin couplé à un fluorophore. Je ne parviens pas à obtenir un marquage correct de l'actin. Mon maitre de stage pense que je réalise trop de rinçage après la phalloidin (alors que c'est dans son protocole).  [...]

immunofluorescence

les 3 techniques sont bien utilisées toutes les 3 en elisa. celle en sandwich consiste a coaté une plaque avec un anticorps. ensuite tu rajoute ton antigène qui va se fixer a ton anticorps. tu rajoute ensuite un autre anticorps marqué avec un marqueur fluorescent qui va se fixer sur un autre épitope de ton antigène. tu n'as plus qu'à lire les résultats.  [...] En sandwich peut également être pour faire de l'immunolocation avec un anticorps fluorescent couplé a le GFP en N-terminal et DsRED en C-terminal par exemple... le tout pour étudier une protéine qui subit un clivage, exemple. la nucléoline... et ainsi suivre dans quel partie de la cellule elle est clivée (Noyau, nucleole, mitochondire ou autre.  [...]

Marquage anticorps secondaire

j'ai pas compris cet extrait... On parle de réaction directe quand le marqueur est directement couplé à l'anticorps primaire, et de réaction indirecte quand on utilise un anticorps secondaire (fabriqué chez l'espèce B) couplé au marqueur dirigé contre l'anticorps primaire (fabriqué chez l'espèce A).  [...] Commences déjà par nous dire ce que tu ne comprends pas, ce qui te fait bloquer.   [...]