• Santé - Protéine, Séquence, Tag

[Biochimie] Séquence Kozak

Je compte insérer une séquence tag (3xFlag) devant la séquence codant pour une protéine qui débute par accatg... donc une séquence Kozak avant l'atg.  [...] En théorie si on met une séquence avant et une séquence après le tag (avant la protéine) il est possible que l'initiation de la traduction commence avant le tag (s'il a bien un ATG...) et aussi avant la protéine (après le tag).  [...]

[Biologie Moléculaire] Protéine étiquetée

C'est une protéine où on va lui coller une séquence Tag (exemple, l'histidine) et ça permet de savoir quel dose de protéines exogènes tu utilise dans ta culture cellulaire.  [...] Le tag est une séquence d'acides aminés rajoutés en amont ou en aval de ta protéine et permet de la visualiser (tags fluos) ou de la purifier (his tag, gst tag...).  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

Ce vecteur ne sert donc pas à produire n'importe quelle protéine mais à mettre les séquences qui vont permettre de promouvoir la transcription du gène rapporteur luciférase.  [...] PinPoint contient un promoteur tac de transcription suivi de la séquence d'un tag-Xa. Le tag est un petit peptide qui permet de purifier la protéine indépendamment de la protéine d'intérêt, il est suivi de Xa qui est une protéine qui peut être clivée et permet de donc de retirer le tag après purification pour n'avoir plus que la protéine native.  [...]

Technique pour intégrer une protéine chimère dans la membrane externe?

Je cherche à savoir s'il est possible, à partir de la séquence nucléotidique d'une protéine d'intérêt ( possédant les carractéristiques membranaire ), d'ajouter une séquence tag, lui permettant d'être intégrée à la membrane extracellulaire, et si oui, comment gérer son orientation d'intégration.  [...] Oui je pense que c'est possible. Il suffit de lui mettre une bonne séquence d'adressage en Nt. Pour l'orientation il me semble que ca va dépendre beaucoup du nombre de segment TM que possède ta protéine. Mais le mieux serait de lui mettre les signaux provenant d'une protéine qui à l'orientation que tu désires.  [...]

Créer une protéine taguée NLS

J'ai ma séquence codant ma protéine dans un vecteur A. je suis capable de la sortir.  [...] Quelqu'un connait-il un vecteur avec un tag NLS dans lequel je pourrai rentrer la séquence codant ma protéine Puis-je acheter directement le TAG.  [...]

[Biologie Moléculaire] cDNA et TAG quelle relation?

et pour le plasmide pTTQ18 on dit que c'est un plasmide qui ne présente pas de cDNA,et pour ça on peut pas purifié le protéine recombinante qui en résulte par chromatographie d'affinité on utilisons le protéine de fusion issu de la traduction de la sequence TAG. est ce que c'est juste.  [...] - la seconde est une notion de biochimie. Un TAG comme par exemple le TAG histidine est une courte portion d'acides aminés permettant notamment de purifier une protéine produite par génie génétique. Dans ce cas, la séquence en ADN codant pour ce tag est insérée au début du gène d'intérêt dans un plasmide.  [...]

[Biochimie] Les Tag en biologie moléculaire

Si je ne dis pas n'importe quoi, un tag est une séquence que tu rajoutes lorsque tu fais des protéines recombinantes avant ou après ton gène (selon si tu veux ton tag en N-terminal ou C-terminal).  [...] L'idée c'est d'accrocher à ta protéine recombinante quelques chose d'utile. ça peut être une séquence qui va coder pour de la fluorescence (détection de ta protéine recombinante dans la cellule par ex), pour un affinity tag (qui va te permettre par exemple d'isoler ta protéine recombinante par une chromato d'affinité), une séquence en Cys-Cys-Pro-Gly-Cys-Cys, qui permettra l'utilisation de FLAsH ou REAsH, un tag qui va modifier la solubilité de ta protéine, un His tag (tag constitué de plusieurs histidines),  [...]

Pourquoi utiliser le vecteur pH6EX3 pour faire du clonage moléculaire?

Dans une séance de laboratoire, on a utilisé le vecteur pH6EX3 pour y insérer un gène qui code pour la protéine BIP, pour transférer tout ça dans des bactéries E.coli. Je me demandais pourquoi on a utilisé ce verteur et pas un autre.  [...] peut être parce que ce plasmide permet de tagger l'insert avec un 6His. En fait cela permet de produire une protéine de fusion constituée de la séquence codée par l'insert et du tag 6xHis, tag qui peut être utilisé ensuite pour de la purification sur colonnes style NiNta, pratique pour avoir un peptide pur (ou presque).  [...]

[Immunologie] Fixation pour immonofluorescence

Je sais que la GFP est compatible avec la fixation des cellules, mais cela dépend peut-être de la protéine à laquelle elle est taggée. D'autre part, ici tu utilises des formes modifiées de la GFP, as-tu regardé dans des publications si de l'observation de fluorescence sur cellule fixées a été réalisé avec ces marqueurs fluorescents.  [...] Je vais surement dire quelque chose de tres tres bete, mais je lisais ce que tu avais ecrit, et qq chose a du m'echapper... Si tu réalise un immunomarquage de tes tag sur vecteur vide c'est normal que tu n'ais pas de marquage nan ton tag etant lié a ta sequence codante, sans sequence codante pas de tag.  [...]

[cytologie] la Synthèse des protéines

Je n'ai pas compris ce qu'est la lumiere du RER et est ce que du moment que la proteine s'y trouve elle se trouve par consequent virtuellement a l'exterieur de la cellule.  [...] Dû au fait que la protéine possède un genre de tag hydrophobe dans sa séquence, qui va être reconnu par des récepteurs à la surface du RER. Une fois accrochée, la protéine passe dans la lumière du RER pendant que le ribozome termine la traduction protéique.  [...]