• Santé - Protéine, Poids, Cellule

Lecture graphique éléctrophorèse

- D'après les expériences (protocole) 1 et 2, le noyau est plus riche en protéine de faible poids moléculaire que la cellule considéré globalement. Faux pour la correction, vrai pour moi, le graphique de droite sur le noyau possède une radioactivité plus faible ( de 0 à 600) que celle du graphique de gauche sur la cellule (0 à 3000) donc logiquement.  [...] Idem pour la question 2 D'après les expériences (protocole) 1 et 2, le noyau est plus riche en protéine de faible poids moléculaire que la cellule considéré globalement., ici meme si on se place à 43 on est obligé de jauger le nombre de proteine en fonction de leur réactivité.  [...]

[Physiologie] Hématie et liquide de Ringer-albumine ?

Pour la 1ère expérience c'est normale car le plasma est riche en protéine comme les globulines alpha,globuline béta, globuline gamma et fibrinogène tous produit par le foie et qui on cette particularité d'avoir un poids moléculaire très élevés ainsi que la capacité de formé des ponts entre protéine et cellule. donc augmentation de la viscosité.  [...] Pour la 2 ème je comprends pas trop le liquide de ringer est un liquide physiologique pourquoi il n'y a pas eu d'agrégation des globules rouges en rouleaux.   [...]

[Biologie Moléculaire] Disparition inexplicable

C'est un peu délicat, car on ne dispose pas d'anticorps contre cette protéine dans la communauté. Aussi on utilise un anti-GFP. Le hic c'est qu'en western je vois ma protéine de fusion au poids attendu (poids de la protéine + poids du GFP), mais chez ces souris la fluorescence sanguine était encore présente, donc il n'y a pas de soucis pour elles.  [...] Le problème du western, c'est que les cellules de souris qui n'expriment plus de fluorescence sanguine ne donnent pas une protéine au poids attendu. Il est plus bas et je me retrouve avec plusieurs bandes, comme si je disposais de plusieurs isoformes de la protéine transgénique mais avec un portion GFP de taille variable.  [...]

[Immunologie] immunoblot...

Pour lire un poids moleculaire d'une proteine inconnue sur un gel, je dessine une courbe de calibration avec mes poids moleculaires standards. et apres Y a t-il un rapport logarythmique dans la migration des molecules.  [...] Je crois que l'objet de la question de Clac2000 est comment, à partir du standard, on détermine pus précisément le PM de la protéine. Si tu la connais, effectivement c'est juste une vérif et une lecture approximative sur le gel suffit. Si tu ne la connais pas, tu peux faire une courbe ou tu mets le Rf (distance parcourue/distance totale) en fonction du poids moléculaire connu de tes standards.  [...]

[Biochimie] Déterminer le poids moléculaire d'une protéine après chromato

Après on a deux méthodes pour trouver sa masse moléculaire. Soit on trace une droite reliant le log(MM) des standards en fonction de leur volume d'élution et dans ce cas on trouve 85 kDa pour la LDH. Soit on passe par le Kav (défini dans notre poly comme (Ve-V0)/(Vt-V0) ce qui correspond au coefficient de partage), et dans ce cas, on trouve 123 kDa.   [...] Les résultats sont ce qu'ils sont. Le problème c'est que c'est la même valeur de volume d'élution qui me donne soit 85kDa soit 123kDa... Je ne comprend pas d'où vient une telle différence. Comme je sais que la LDH fait environ 130 kDa, je suppose que la deuxième méthode est plus précise, mais pourquoi.   [...]

La cryogénisation : une utopie ?

On lit toujours que le procédé n'est pas au point car il détruit les cellules... Dans quelle mesure cela est-il grave Une technique avancée pourrait-elle régénérer les tissus, ou les lésions sont trop graves En particulier, les neurones sont-ils touchés.  [...] Pour une de nos cellules, seules les protéines sont encodées. et encore il n'est marqué nulle part quand ni où les utiliser. Ces protéines représentent peut-être 40% du poids sec de la cellule, c'est encore pire si on compare à la masse totale humidifiée.  [...]

[Biochimie] Questions Western Blot

Tout d'abord, comment fonctionne exactement un gel de concentration Si j'ai bien compris, il est censé concentrer en fine bandes les protéines déposées dans les puits en fonction de leur PM, mais comment cela est-il possible exactement Quel est le mécanisme.  [...] -de retenter le coup avec ta membrane uniquement si tes anticorps sont de bonne qualité / ta protéine se révèle facilement. Si c'est pour une hybridation plus délicate, tu risques d'avoir un résultat de mauvaise qualité.  [...]

[Biochimie] Modifications post traductionnelles et électrophorèse !

Ma protéine fais 220 kDa (BRCA1) et pour arriver à avoir un shift suffisant pour être visible à des poids moléculaires pareils, il faut au minimum un écart de poids moléculaire d'1 kDa et encore. Un phosphate faisant grosso modo 80 g.mol-1...il faudrait une bonne quinzaine de phosphate sur les protéines hyperphsophorylées pour dépasser légèrement 1 kDa.  [...] C'est possible mais ça fait une sacrée phosphorylation. Mais je suis d'accord avec toi que le SDS recouvre la protéine (je n'y ai plus pensé à ça... ) donc mon hypothèse est un peu foireuse, la tienne étant la plus probable. En plus sur 1863 acides aminés, c'est possible, les phosphorylations de cette protéine démontrées actuellement étant déjà une bonne dizaine, sans compter celles qui restent sans doute à découvrir.  [...]

[Biologie Cellulaire] swiss prot

Tu n'as pas besoin de swiss prot et d'ailleurs je ne suis pas certain que cette fonction existe, en tout cas dans swiss prot. La phosphorylation ne modifie pas le poids moléculaire global de la protéine (la masse du phosphate est complètement négligeable).  [...] Je ne crois pas en une quelconque interaction entre les groupements phosphate (Vinc, tu en dis quoi). Il s'agit plutôt d'un encombrement stérique qui fait que sur gel on a l'impression que le poids moléculaire de la protéine est supérieur de 2-3 Da. Dans ce cas, tu as ce shift dont parle Vinc (tu as deux bandes correspondant à ta protéine, légèrement espécées).  [...]

[Biochimie] séparation de protéines

alors voilà mon problème. nous avons un mélange de protéine (on sait pas trop leurs poids) que nous voulons séparer et caractériser par la suite. Actuellement je fais des SDS-PAGE (15%), mes échantillons sont des fraction issus d'une chromato échangeuse d'ion.  [...] j'ai également fait une MS/MS sur ces mêmes échantillons et trouve des poids du genre 20kDa, 40kDa, 82kDa... je pense qu'il y formation de dimère lors de la migration, ou on a vraiment des protéine de ce poids... comment en être sur.  [...]