• Santé - Protéine, Intérêt, Microscope

[Biologie Cellulaire] immunofluorescence ???

Concernant l'immunofluorescence tu trouves ça très facilement sur le net... Tu utilises un anticorps reconnaissant spécifiquement ta protéine d'intérêt (même si en pratique c'est pas toujours aussi simple et spécifique et que ça nécessite beaucoup de mises au point).  [...] Tu peux faire ça à partir d'une culture cellulaire, d'une coupe de tissu... et visualiser où ce situe ta protéine d'intérêt grâce à un microscope à fluorescence... Voilà le plus simple à retenir.  [...]

Problem:vecteur contenant GFP ne fluore pas

j'ai crée un vecteur. promoteur 35S, suivi de l'ADN de ma proteine d'interet, suivi de GFP4. J'ai transformé mes petites Arabidopsis, ai sélectionné les transformées.. les ai observées avec microscope confocal..... et rien...aucun signe de fluorescence. je ne comprends pas.  [...] Rebondissement. j'ai fait une extraction DNA, suivie d'une PCR pour déterminer si mes plantes -resistantes à BAsta, je tiens à le préciser..- contenait 35Scassette/proteine/GFP... le vide complet. apparemment ma transformation n'a pas fonctionné. GFP n'est pas en cause.  [...]

coloration de proteine et observation au microscope

je travaille dans un labo de recherche, et apres coloration d'une proteine donne nous avons pu voir quelle forme de minuscule petits points dans la cellule.  [...] Déjà, est ce que le marquage est spécifique et validé Après, ca peut être effectivement dans des lysosomes, des vésicules de sécrétion, etc... Mais pour le savoir, il faut changer de méthode. co marquage, MET, etc. Connaitre la protéine peut déjà aider. signal de localisation protéine sécrétée des partenaires d'interaction connus.  [...]

[Biologie Cellulaire] isolation des mitochondries

Mon but n'est pas spécialement de purifier les mitochondries, mais de pouvoir les différencier des autres organelles, car j'ai marqué une protéine qui devrait aller dans la mitochondrie avec du RFD et au microscope c'est pas claire si c'est une mito ou pas.  [...] Dans ce cas là, t'as pas besoin de purifier tes mitochondries. Ce qu'il te faut c'est un marqueur spécifique de la mitochondrie. Comme ça tu peux voir si il y a colocalisation entre le marquage de ta protéine et le marquage de tes mitochondries. Tu peux utiliser le Mitotracker (Invitrogen je crois) comme marqueur.  [...]

[Biologie Cellulaire] centrifugation différentielle, peroxisomes

Parce que j'ai fait un Tp où on doit repérer une proteine par immunofluorescence, sur les photos tirées du microscope à fluorescence non confocal, la proteine serait plutôt dans le cytoplasme, peut-être sous forme de vésicules parce que c'est pas très homogène.  [...] On casse les cellules et on fait des centrifugation différentielles, celle à 2000G sépare le culot C1 du surnageant S1. Par analyse avec le Western Blot, avec les Anti-corps dirigés contre ma proteine, on voit que la proteine recherchée est dans la fraction C1.  [...]

En bref : des citrouilles pour terrifier les microbes

Ils ont ainsi découvert qu'une protéine (Pr-2) inhibe la croissance de plusieurs microbes, dont Candida albicans, une levure responsable d'infections fongiques au niveau des muqueuses digestives et vaginales.  [...] L'analyse au microscope électronique à balayage après traitement au Sytox Green (marqueur fluorescent) a révélé que la protéine Pr-2 agit au niveau de la membrane des cellules. D'autres analyses ont prouvé que cette protéine était résistante à la chaleur et qu'elle n'avait pas d'effet cytotoxique.  [...]

La protéine du cancer du sein, BRCA2, est enfin purifiée

La purification d'une protéine permet de pouvoir l'étudier sous toutes les coutures. Elle permet de mettre la protéine en contact avec d'autres partenaires protéiques ou nucléiques pour déterminer précisément son rôle biologique. La protéine peut également être cristallisée afin d'en déterminer la structure et donc d'ouvrir des pistes pour découvrir des molécules capables d'interagir avec elle ou d'inhiber sa fonction.  [...] Les chercheurs ont aussi montré qu'il existerait des formes monomériques et dimériques de la protéine BRCA2, d'après des observations au microscope électronique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de detection de ma protéine par immunofluorescence

voila j'ai transfecté mes cellules (HepaRG) avec un plasmide pcDNA3.1 Directional TOPO (Invitrogen) contenant mon insert d'intérêt (la protéase NS3 du virus de l'hépatite C). Ce plasmide contient aussi une tag V5, qui me permet (normalement ^^) de detecter ma protéine une fois exprimée dans mes cellules (grace à un anticorps anti-V5, Invitrogen).  [...] J'ai une question un peu bête mais as-tu vérifié que ta protéine de fusion NS3-V5 est bien exprimée dans tes cellules après transfection avec un simple SDS-PAGE Je n'ai jamais fait d'expression en cellules eucaryotes mais je suppose que c'est un peu comme pour les bactéries.  [...]

[Biochimie] Différence entre bio mol et biochimie

si tu résumes les differences (apres tout c'etait ta question), tu pourrais ajouter a ta conclusion, que les labos de biochimie et de BM n'appliquent pas les memes techniques pour poser leurs questions (qui du coup sont rarement les memes dans le detail, meme si effectivement il est toujours question de biologie a l'echelle subcellulaire, donc s'interessant a des molecules).  [...] la fusionner avec une proteine qui fluoresce et observer la localisation de la proteine fusionnée dans la cellule a l'aide d'un microscope, c'est de la biologie cellulaire (qui s'est aussi servie d'un peu de BM au depart, et dont l'outil est peut etre perfectionné dans le labo de biophysique voisin).  [...]

[Biologie Moléculaire] suivi d'infection virale

Dans ce cas, il te faut réaliser une infection avec une protéine couplée à un fluorophore. Et suivre sur la fluo sur cellules au microscope.  [...] Dans le cas de HIV il y a pas mal de choses de faites sur le transport, avec l'intégrase couplée GFP, ou des protéines accessoires comme Vpr-GFP.  [...]