• Santé - Protéine, Gamme, Anticorps

[Biochimie] Quantifier un western blot

le film a une gamme de réponse linéaire, le substrat aussi, la quantité d'anticorps joue aussi un rôle. C'est pour cela que l'idéal est d'avoir une gamme de quantité sur le même gel, et sur la même expo de la même protéine, pour t'assurer que tes conditions sont bien quantitatives.  [...] D'accord avec toi, mais pour faire un bon ELISA, faut avoir 2 anticorps spé sur protéine non dénaturée, de la protéine purifiée pour faire la gamme, etc.  [...]

[Biochimie] Dosage des protéines???

à première vue 2 idées me viennent. dosage BCA si la protéine est pure et ELISA si on dispose d'une gamme étalon et des anticorps adéquats. Il y en a surement d'autres.  [...] Connaissant le coefficient d'absorption molaire (si tu ne le connais pas, suffit juste de taper la séquence de ta protéine dans un logiciel accessible sur le net tel protein calculator ), tu peux facilement déterminer la concentration.  [...]

[Biochimie] Calcul de quantité de proteine

Voilà j'ai un doute concernant un calcul. En faite je fais une gamme de proteine qui me permet de calculer les proteines totales presentes dans mes essais. Cette gamme est en mg/mL. Ensuite je fais une autre manip qui me permet de connaitre la quantité d'une proteine specifique.  [...] La gamme de cette proteine specifique est en ng/mL. Or au final je veux une quantité en ng de cette proteine par mg de proteine totale. Dc je divise ma quantité en ng de proteine specifique par ma quantité en mg de prot totale. Est ce que le raisonnement est bon.  [...]

[Biologie Cellulaire] Dosage protéines dans du glycérol ?

Est-ce que tu as vraiment besoin de doser ton anticorps Si c'est pour faire un western, tu peux toujours faire une gamme avec plusieurs volumes d'anticorps pour avoir une idée de la quantité optimale. Ca ne va pas te donner la concentration mais tu pourras toujours faire des belles choses avec.  [...] Tu peux diluer tes échantillons pour diminuer la concentration de glycérol. Le pb, c'est que tes anticorps seront aussi dilués, donc il ne faut pas trop diluer. Pour ta gamme, fait la dans les mêmes conditions, c'est à dire avec les mêmes concentrations d'anticorps.  [...]

Test ELISA

J'ai réalisé un test ELISA en TP afin de déterminer la concentration d'une protéine dans un échantillon. Afin que ce test soit quantitatif, j'ai réalisé une gamme de concentration. Après mesure de l'absorbance, j'obtiens des résultats aberrants qui ne sont pas interprétables (à la fois pour ma gamme de concentration et pour mon échantillon).  [...] Est-ce que tu as fait des contrôles du style. anticorps I, anticorps II, substrat (sans antigène pour vérifier si tes Ac I et II ne se fixent pas sur autre chose que ton antigène donc s'ils sont vraiment spécifique de ton antigène) / anticorps II, antigène, substrat (sans Ac I pour vérifier si ton Ac II ne se fixe pas directement sur ton antigène ou à une autre protéine) / substrat (voir s'il s'oxyde spontanément).  [...]

[Biochimie] Absorbance

En gros je fais une gamme étalon, de protéine en solution ( juste de l'eau distillée ) de concentration connue. Du coup, ben je soustrais l'absorbance de mes tubes de protéine avec l'absorbance de l'essaie avec l'eau. La pas de souci.  [...] Puis après, je regarde l'absorbance de mes tubes de protéines avec du tampon, sans eau distillée ( du coup je soustrais l'absorbance du tampon. Et de l'essaie à blanc avec l'eau non ).  [...]

[Biochimie] dot plot et overlay

Dans le but d'étudier les interactions entre 2 protéines, je voudrais faire un dot plot pour immobiliser ma première protéine sur la membrane de nitrocellulose, par la suite je voudrais faire un overlay ou j'incube ma membrane de nitrocellulose dans la solution de la deuxième protéine et je révèle les interactions par l'anticorps de la deuxième protéine.  [...] Si tu es riche en matériel, tu peux commencer par faire des tests par toi même, par exemple en faisant une gamme de quantité a déposer, puis une gamme de concentration de ta solution de protéine, sans oublier les contrôles adéquats.  [...]

[Biotechnologie] microtitration GFP

j'aimerai savoir comment fonctionne la détection de la GFP par microtitration Quels sont les anticorps qui interviennent.  [...] Je ne suis pas sur que tu fasses intervenir des anticorps. C'est selon moi une quantification de la fluorescence de la GFP à l'aide d'une gamme de dilution.  [...]

[Biochimie] Purification de protéine pour ELISA

Mon principal problème (outre mes connaissances très limitées en biochimie) est que mon laboratoire dispose de relativement peu de moyens, et que je ne peux donc pas faire des anticorps adaptés à la carte. Je ne dispose que d'un seul anticorps (polyclonal) capable de se liguer à elle (A), et d'un seul anticorps conjugué (B, polyclonal aussi) qui reconnaît l'anticorps A.  [...] Mais comme l'anticorps A est utilisé 2 fois, j'ai peur que le conjugué ne se fixe aussi aux Ac A coatés à ma plaque mais sur lesquels ma protéine ne s'est pas fixée, et que du coup j'aie à peu près le même signal partout.  [...]

Digestion avant MS

après il y a aussi des contraintes techniques. est ce que la protéine s'ionise bien en ESI, est ce qu'on dépasse pas la gamme de masse accessible.  [...] typiquement, on va faire un préséparation, une digestion, une séparation, l'injection en MS, puis analyse MS/MS pour avoir la séquence, la position modification post trad et sa séquence (s'il y en a une).   [...]