• Santé - Protéine, Fusion, Vecteur

Protéine de fusion recombinante dimérique, besoin d'aide.

C'est un vecteur d'expression pour la proinsuline et l'écotine. Et dans l'énoncé, il est noté que l'écotine est une protéine dimérique. Du coup, je pensais qu'il fallait faire deux plasmides. Un avec la proinsuline et l'écotine et un autre juste avec l'écotine.  [...] Si l'écotine se dimérise, il suffit de faire un seul vecteur avec un gène fusionnant écotine et proinsuline, et la dimérisation de cette protéine de fusion se fera spontanément via le domaine écotine.  [...]

[Biologie Moléculaire] Urgent Clonage

C'est pas détaillé mais il manque encore des infos. nature/taille de l'insert y a-t-il des sites de restriction pour le sortir de l'ancien vecteur faut-il cloner en phase avec quelque chose (Tag, protéine de fusion).  [...] La protéine que je veux exprimer doit avoir une GFP et un tag His, ces deux là sont déjà dans le nouveau plasmide, mai puisque je dois synthetiser mes amorces avec un codon stop, comment ces tags peuvent-ils etre lus.  [...]

[Biologie Moléculaire] Protéine de fusion

Je me demandais pourquoi on créait des protéines de fusion avec des immunoglobulines (exemple.la protéine de fusion CTLA4-Ig).  [...] En fait on utilise ces protéines de fusion pour faciliter la purification de la protéine et son couplage ultérieur à autre chose pour de la vectorisation. En général c'est juste le domaine Fc qui est pris dans la protéine de fusion, si tu veux en savoir plus envoie moi un MP.  [...]

[Génétique] Transfection

je voudrais savoir si les cellules transfectées transitoirement par un vecteur codant la proteine de fusion c-Myc-GFP expriment toujours la proteine c-Myc endogène.  [...] La fusion à la GFP permet juste de suivre t'as prot d'interet (myc). Donc la myc s'exprime mais l'expression ou le suivis (tout depend du but de la fusion) est rapporté par la GFP.  [...]

Vecteur de clonage, PCR et vecteur d'expression

Ils disent ensuite que le produit de PCR () est purifié par électrophorèse sur gel d'agarose et ensuite il est encore inséré dans un autre vecteur entry vector en utilisant une deuxième PCR(). Puis ils utilisent enfin un vecteur d'expression pour obtenir la protéine de fusion GST-gene d'intérêt.  [...] 1. il faut changer de plasmide, refaire un clonage en faisant une fusion avec AD ou BD et donc re introduire des erreurs potentielles indépendantes du premier clonage.  [...]

Probleme d'induction de GST dans bacterie

Comme écrit dans mon titre on essaye d'induire l'expression de la GST et d'une protéine fusionné avec la GST dans des BL-21 avec de l'IPTG. Le vecteur est PGEX-4T3.  [...] 7. Si tu n'arrives pas à produire la GST seule, c'est ton protocole de production qui a un problème. Essaie un autre protocole avec le vecteur vide d'abord puis une fois que ça marchera tu essaieras avec ta protéine de fusion.  [...]

Traduction de termes anglais issus d'un article.

FLAG c'est une étiquette protéique qu'on ajoute aux protéines (protéine de fusion) justement pour faciliter sa détection, ou sa précipitation (avec un anticorps anti flag).  [...] si c'est ca. En fait il existe des vecteurs ou le tag (flag, 6his, myc, ou autre) est déjà là, en amont ou aval du site de clonage, du coup en intégrant ton cDNA en phase dans ce vecteur tu peux directement produire une protéine de fusion. Pratique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gfp

Quelqu'un saurait-il me dire s'il est possible d'effectuer une transfection à l'aide d'un vecteur contenant uniquement le gène GFP (ou autre prot fluorescente), çàd sans l'utiliser en protéine de fusion Mon but est de suivre un clone cellulaire que j'utilise en coculture (comme cellules nourricières) avec un autre type cellulaire et à la fin de la manip j'ai une étape de lavage pour me débarrasser de mes cellules nourricières, mais j'aimerai un système me permettant de quantifier ou en tout cas de visualiser ces dernières.  [...] oui c'est tout a fait possible, il existe plein de constructions, adénovirus ou autres permettant l'expression de GFP dans des cellules eucaryotes.   [...]

[Biochimie] Etude des partenaires protéiques : Co-Immunoprécipitation, Tap-Tag et double hybride

pour créer une protéine de fusion, il te faut les cDNA des deux protéines. Tu les insere dans un vecteur à la suite, en prenant soin de les mettre en phase et en supprimant le codon stop de la premiere, comme ça tout est traduit en une fois. A ma conaissance on fait du double hybride chez la levure puisque ca n'est pas un procaryote.  [...] Et le vecteur utilisé pour le clonage, de quoi s'agit-il Plasmide, cosmide, YAC Et comment ce vecteur s'exprime chez la levure Le gène rapporteur, il se situe où Il faut forcément que l'organisme qui exprime les protéines fusions soit un eucaryotes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pull down GST

J'ai quelque souci de production de la protéine, j'arrive en avoir mais à des quantités pas très élevée. Sauriez-vous combien il faut de proteine en fusion avec la GST sur les billes pour faire le test pull down.  [...] Personnellement j'utilisais environ 10-15µg de proteine de fusion GST (80kDa au total) couplées aux billes GST pour faire mes test d'intéractions.  [...]