• Santé - Protéine, Fusion, étiquette

Traduction de termes anglais issus d'un article.

FLAG c'est une étiquette protéique qu'on ajoute aux protéines (protéine de fusion) justement pour faciliter sa détection, ou sa précipitation (avec un anticorps anti flag).  [...] si c'est ca. En fait il existe des vecteurs ou le tag (flag, 6his, myc, ou autre) est déjà là, en amont ou aval du site de clonage, du coup en intégrant ton cDNA en phase dans ce vecteur tu peux directement produire une protéine de fusion. Pratique.  [...]

[Biotechnologie] purification d'une protéine

Je ne suis pas du tout experte en purification de protéines mais en lisant les différentes étapes de la manip je me dis qu'en insérant la séquence codante pour la ligase dans E. coli, ils ont peut être en même temps créé une protéine de fusion avec une étiquette (par exemple GST ou Tag) et ont pu ensuite purifier cette protéine de fusion sur une colonne d'affinité.  [...] Cependant, d'après ce que vous me dites, j'isole la protéine grâce à l'étiquette sur colonne d'affinité. Donc je n'aurai sur mon gel, que les pistes 1 2 et 3 soit une seule piste de purification. Or, sur le gel dans la piste 3 et 4 il y a deux résultats de purification.  [...]

Les récepteurs couplés aux protéines G | Dossier

Approche à partir de la queue cytoplasmique du récepteur. Cette approche est basée sur l'interaction de protéines issues de lysats de cerveaux de souris avec la queue cytoplasmique des MTR immobilisée sur une matrice. Une étiquette poly-histidine placée à l'extrémité N-terminale du peptide permet son immobilisation sur des billes recouvertes de nickel.  [...] Approche à partir du récepteur entier (TAP). La technique de purification par TAP repose sur la fusion du récepteur entier avec une étiquette portant deux modules d'affinité séparés par un site de clivage par une protéase spécifique. Cette méthode permet d'effectuer une purification de complexes protéiques en condition native.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteur pET15b

Il me semble qu'il fait office de site de clivage permettant de retirer le HisTag de la protéine (on a pas la thrombine entière dans le plasmide. juste quelques nucléotides).  [...] Pour préciser, dans la protéine exprimée, entre l'étiquette et ta protéine d'intérêt se trouve un site de clivage par la thrombine, qui est une protéase.  [...]

[Biotechnologie] Fabrication d'une protéine d'intérêt ?

Ceci est le minimum si on veut une protéine. Cependant, souvent, on aime bien ajouter une étiquette qui va faciliter la purification de la protéine (GST, FLAG, [HIS] 6, HA, etc...).  [...] Etiquettes, ce sont souvent des bouts de protéine qui fluoresce, on fait en sorte que notre ADN sera introduit juste après l'ADN correspondant à ces protéines, ainsi les deux protéines seront créées ensemble, et on sera sur que la construction fonctionne.  [...]

Purification et extraction des protéines....

Je vous explique ma situation, je suis en deuxieme année de biologie, et j'ai une matière ou je dois crée moi même mon TP de A a Z avec un sujet définit, mon sujet est Purification et caractérisation des propriétés de réduction des ponts disulfures de la protéine DsbA de la bactérie Neisseria meningitidis, le sujet fais plus peur qu'autre chose, mais bon.  [...] On nous fournit a la base du travail des Cellules d'E. Coli Contenant la protéine DsbA3 avec une séquence contenant une étiquette poly histidine.  [...]

[Biologie Cellulaire] étiquette oligosaccharidique

Cependant pour moi c'est vrai, une étiquette oligosaccharidique peut s'accrocher au proteine pendant la n glycosylation et l'adressage des proteines peut se faire soit vers les lysosomes, soit vers la membrane plasmique, soit vers les vésicules de sécrétion selon mon cours.  [...] Dans un cadre simple c'est effectivement faux. En effet tu as raison la protéine peut être glycosylé mais la chaîne oligosaccharidique ne détermine pas l'envoi à la membrane plasmique, il ne s'agit pas d'un motif reconnu pour son bonne adressage. Au contraire, les enzymes lysosomales ont une étiquette oligosaccharidique qui détermine leur adressage au lysosome, c'est le fameux motif mannose-6-phosphate. J'espère que c'est plus clair.  [...]

[Biologie Moléculaire] Purification Protéines Tag 6His

Ce qui arrive parfois avec le [His] 6 c'est qu'il se replie sur la protéine, du coup le rendement de fixation est moisi. Une petite dégradation de la protéine pourrait empêcher cela et augmenter l'affinité de cette version pour les billes. Ce phénomène est totalement protéine dépendant.  [...] Donc c'est un anticorps anti-ta protéine c'est bien ça Tu n'aurais pas un anticorps anti-6His à ton labo pour vérifier si c'est l'étiquette ou une partie de ta prot qui est dégradé.  [...]

[Biotechnologie] Plasmide recombinant

5) Pour les bactéries, on peut ajouter une séquence Flag ou etiquette dans le plasmide afin de permettre une extraction plus facile de la protéine, on peut également ajouter un gène (Ompa) permettant l'excrétion dans le périplasme.  [...] 6) On doit tenir compte de séquences introns (tel UTR5') nécessaire pour la régulation lorsqu'on produit une protéine dans une cellulemammifères. Ces séquences doivent elles aussi être prises en compte pour les levures et bactéries Les séquence de régulation EUC seront elles donc prises en compte chez le PROCARYOTES.  [...]

[Biologie Moléculaire] Immunoprécipitation

Je fais mes IP sur 1,5mg par échantillon (ma protéine n'étant pas trés abondante) donc environ 7 millions de celllules par puit lors du WB. Cela dit après avoir lysé mes cellules (tampon salin ou NP-40 pendant 30 min) je centrifuge le lysat et ne fait mon IP que sur le surnageant.  [...] La protéine d'intérêt est-elle taggée L'anticorps utilisé pour l'IP est -il dirigé contre une étiquette Avez-vous essayé un WB sur le culot de billes après IP en procédant à une étape de dénaturation pour être sûr de dissocier la protéine des billes (parfois des anticorps se lie très fortement, dans ce cas il faut peut-être changer d'anticorps pour rester dans des conditions natives, ou alors tester avec des concentrations salines plus importantes).  [...]