• Santé - Protéine, Fonction, Fusion

[Biologie Moléculaire] Méthodes d'étude de l'ADN

Au labo, on en a déduit que l'anticorps reconnait faiblement d'autres protéines de la famille SR... Donc une non-spécificité à prendre en compte, même si le ratio protéine SC35/autres protéines SR donne SC35 largement gagnante (en voulant arranger les résultats, il est possible de ne faire apparaître que la protéine SC35, en contrôlant le temps d'exposition).  [...] Ajoutons à cela une IF, et on observe que la protéine SC35GFP à une distribution caractéristique des speckles, corps nucléaire où elle se trouve en majorité. On dispose donc d'une protéine fusion probablement fonctionnelle (vu que sa fonction est liée à sa localisation).  [...]

[Biochimie] Gfp

Je voudrais savoir lorsqu'on veut créer une souris transgnique permettant de viasualiser d'une protéine par exemple, le GFP est-ce qu'on l'insère avant l'exon (donc entre le promoteur et l'exon) ou après l'exon.  [...] Ca dépend, des fois une protéine peut perdre sa fonction lorsqu'on lui ajoute une GFP de fusion, donc en général on essaie. Si problème, on peut la coller a l'autre extrémité.  [...]

[Biologie Moléculaire] Protéine de fusion

Est-il possible que la protéine de fusion soit utilisée dans l'objectif de découvrir les fonctions de la forme soluble d'une protéine transmembranaire déja connue La protéine de fusion pourrait-elle mimer les fonctions de la protéine soluble initiale.  [...] Pour réaliser une protéine de fusion, la plupart du temps on ligue une séquence de restriction en 3' de l'ADNc codant la protéine N-terminal et la même séquence de restriction en 5' de l'ADNc codant la protéine C-terminale. On choisi une séquence qui une fois clivée génère des bouts collants.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pull down GST

j'essaye de produire une protéine en fusion avec la GST afin de faire des tests d'interaction pull-down avec des extraits cellulaires.  [...] J'ai quelque souci de production de la protéine, j'arrive en avoir mais à des quantités pas très élevée. Sauriez-vous combien il faut de proteine en fusion avec la GST sur les billes pour faire le test pull down.  [...]

Facteur de transcription MYB80

Par la suite il utilise un transformant qui exprime le MYB80 sous la dépendance de GR(glucocorticoide) qui empêche la protéine de s'introduire dans le noyau, seul le traitement au DEX permet de la faire rentrer. Sachant que ce MYB n'a un rôle que dans le noyau ils auraient du trouver le même résultat que le microarray sur le mutant, mais ce n'est pas le cas.  [...] Le transformant suexprimant MYB80 a été réalisé dans une lignée sauvage ou dans la lignée mutante. Si cela a été réalisé dans la lignée sauvage, il te reste encore le gène endogène qui peut remplir sa fonction. Es-ce le cas.  [...]

Phage display et banque d'ADNc

Le principe c'est de faire exprimer la protéine à la surface du bactériophage et puis d'isoler les bactériophages qui expriment la protéine d'intérêt à l'aide d'Ac (et pour réaliser ca, on fait des protéines de fusion).  [...] Mais du coup, si une banque, c'est plein d'ADNc différents, on fait des protéines de fusion avec tous les ADNc différents et du coup le phage va exprimer en protéine tous ces ADNc Et après on fait la sélection.  [...]

[Biologie Moléculaire] Disparition inexplicable

J'utilise une protéine transgénique qui est en fusion avec le marqueur GFP. Grâce à la fluorescence il m'est possible de suivre l'expression de ma protéine dans le sang des animaux. Mais voilà que la fluorescence a subitement disparue de tous les animaux, alors que la protéine transgénique continue de s'exprimer.  [...] Mais aucune homologie de séquence. Mais mon gros soucis reste d'expliquer la perte de GFP en dépit du maintien d'une protéine fonctionnelle.  [...]

Protéine de fusion recombinante dimérique, besoin d'aide.

Pour une protéine de fusion, les deux séquences codantes sont mises à la suite l'une de l'autre sans codon stop entre les deux. une seule chaîne est produite.  [...] C'est un vecteur d'expression pour la proinsuline et l'écotine. Et dans l'énoncé, il est noté que l'écotine est une protéine dimérique. Du coup, je pensais qu'il fallait faire deux plasmides. Un avec la proinsuline et l'écotine et un autre juste avec l'écotine.  [...]

Interaction cellule/virus

Ou sinon tu construits une protéine de fusion GST/glycoprotéine virale et tu fais un pull down classique sur un un lysat membranaire des cellules sensibles pour voir si tu descends bien ton récepteur cellulaire... T'as pas forcément besoin d'une interaction avec la cellule entière...non.  [...] Il existe un anticorps contre la glycoprotéine, mais on le sait deja que cette glycoprotéine est impliquée dans la fusion. Moi je m'interesse à l'interaction glycoprotéine/recpteur, et la fonction de cette interaction. Il me faudrait un anticorps contre le recepteur cellulaire, mais il n'existe pas.  [...]

physiologie du cancer

- mutation dite gain de fonction. la cellule devient par des mutations constitutivement sensible à des facteurs de croissance par exemple.  [...] Les translocations sont des évènements cytogénétiques qui peuvent avoir plusieurs conséquences. On peut par exemple avoir formation d'une protéine de fusion (fonctionelle) après cassure dans 2 gènes différents et raboutement de ces 2 séquences. Ces protéines de fusions peuvent alors acquérir des propriétés que ne possédaient aucune des 2 protéines séparémment.  [...]