• Santé - Protéine, Extraction, Efficace

[Biologie Moléculaire] kinase

Ce qui me fait dire que la proteine est phosphorylee est que le 2 amino-purine (un inhibiteur de kinase) affecte fortement la reaction dans laquelle cette proteine interviens. Maintenant il n'est pas imppossible que ca soit un effet plus indirect, mais je tente le coup.  [...] D'une maniere generale, lorsque tu cherches a montrer une phosphorylation, tu utilises des anti-phosphatases dans ton tampon d'extraction de la proteine ou de lyse des cellules. Rien ne t'empeche de l'utiliser dans ton lysat de reticulocyte. Celui utilise est souvent l'orthovanadate de sodium, tres efficace et spectre tres large.  [...]

[Biochimie] Trypsine ou Pronase

J'ai un TP de biochimie à faire où on doit purifier de l'ADN et à une certaine étape, on ajoute de la pronase à l'ADN pour briser les peptides en solution. Par la suite, on fait une extraction au phénol/chloroforme pour enlever les protéines et lipides de la solution contenant l'ADN. Alors, j'aimerais savoir.  [...] 1. Si on utilise de la trypsine au lieu de le pronase, cela fait en sorte que les protéines sont hydrolysées en de moins petits fragments. Ma question est. quel impact le fait d'avoir des fragments de protéine plus gros a sur le reste de la purification Est-ce que l'extraction au phénol/chloroforme sera moins efficace Si oui pourquoi.  [...]

[Biochimie] Extraction protéine cry du bacillus thuringiensis

J'ai une présentation à réaliser sur l'extraction de la protéine cry (insecticide) du bacillus thuringiensis. Uniquement l'extraction et non la culture et la purification. Le problème est qu'il existe énormément de méthodes liées à l'extraction de cette protéine, et je m'y perd donc un peu.  [...] La méthode que je choisirais pour une telle isolation serait une destruction physique (Homogénéisateur de type Dounce, presse Aminco- French...) suivie d'une sédimentation pour séparer les composants. Ces méthodes conviennent-elles à mon problème De plus, avez vous une idée du tampon à utiliser pour réaliser cette extraction (SDS ).  [...]

[Biologie Moléculaire] couplage inverse ARNm - protéine ??

Attention aussi, ça peut être un effet annexe, genre une augmentation d'activité des RNases induite par votre protéine, ou une diminution de l'efficacité de votre extraction.  [...] en effet, il s'agit de RT-qPCR. Les extractions/RT/PCR sont faites en même temps pour les deux souches. Vérif ARN en DO = valeurs identique + pureté identique entre les deux souches.  [...]

BL21 pour production protéines et extractions

J'aimerais extraire mes proteines recombinantes de mon mutant BL21, pour cela j'aimerais eviter les methodes classiques d'extraction (tampon et sonication).  [...] J'aimerais produire de la Taq polymérase, j'ai finalement choisi la souche Mach1. J'aurais aimé une méthode d'extraction/ purification rapide, simple et efficace. Quels sont vos protocoles.  [...]

[Biochimie] extraction protéine d'une huile ou d'une cire pour quantification

[Biochimie] extraction protéine d'une huile ou d'une cire pour quantification.  [...] Cela ma permis d'obtenir des début de résultat mais, mon extraction témoin ne ma permit de récuperer que 40% de mon ajout protéique.  [...]

[Biochimie] Extraction proteine nucleaire nematode

Si c'est un facteur de transcription tu as différentes solution, soit tu fais un ChIP mais il te faut un anticorps contre ta protéine d'intérêt.  [...] Bon je ne suis qu'étudiant pour le moment, donc je te déblatère ce que j'ai vu en cours. J'ai un peu bossé sur le nématode en stage mais j'ai pas purifié de proteine.  [...]

[Biochimie] Extraction d'une protéine nucléaire pour WB

J'ai d'abord commencer à faire une extraction au SDS (plus cocktail d'inihibiteur), j'ai aussi essayé tampon d'extraction classique (Triton, Glycerol, NaCl, EDTA, anti protéases). Apres dosage et dilution dans lameli, j'ai fait un WB (migration sur gel 10% SDS.  [...] Le probleme c'est que ma protéine est pas très exprimé et les anticorps ne sont pas de très bonne qualité (et les tampons d'extraction pas forcement les meilleurs), au final j'ai beaucoup de non spécifique, pas beaucoup de signal au niveau de ma bande.  [...]

[Biochimie] chaine polypeptidique

La cristallographie reste le meilleur moyen de retrouver la structure fine de ta protéine mais la préparation d'échantillon est complexe et non garantie (extraction non dénaturante, cristallisation de la protéine, etc..).  [...] La RMN offre les meilleurs informations sans avoir à manipuler les protéines mais plus la protéine est grosse plus le spectre est difficile à analyser et passé 30KDa, il faut faire appel à des spécialistes et ils sont rares.  [...]

Si je suis trop gros, c'est la faute de mes bactéries

cette inégalité devant la nourriture proviendrait de la flore intestinale. Chez les personnes obèses, la population bactérienne serait plus efficace pour l'extraction des sucres.  [...] Les bactéries contenues dans notre intestin, et qui commencent la digestion des aliments, seraient, d'une personne à l'autre, plus ou moins efficaces pour extraire les sucres. Mais la nature des échanges entre notre corps et ses ouvriers microscopiques de la digestion reste largement incomprise.  [...]