• Santé - Protéine, Cellules, Localisation

[Biologie Cellulaire] extraction protéique (ERK1/2) à partir de cellules U2OS

je suis un nouveau dans ce forum, j'ai un soucis, je voulais faire des culots cellulalires à partir des boites 35mm de cellules transfectées, la derniere fois javais pas beaucoup de prot en dosage lowri sachant bien que je gratte ma boite de cellules dans du PBS et je centrifuge 1000 RP 2min, après je lyse mes cellules dans du leamli 2X et je l'ai dose et ce que kelk'un pourrait me donner un protocol.  [...] j'ai une autre question differente je voulais peter un culot de cellules cultivées dans des boites 35mm j'utilise le grattage dans du PBS 1X la kestion à combien je centrifuge pour avoir un bon cult sachant que la derniere fois javais presque rien de materiel lors du dosage lowry.  [...]

La microscopie à 2 photons et le mouvement des proteines

La protéine est alors pistée dans les cellules. sa localisation spatio-temporelle peut être déterminée avec précision (à 10 millisecondes et à 1 micron près).  [...] En utilisant la microscopie confocale simple ou a 2 photons, on peut aussi visualiser en temps reels l'interaction de deux proteines dans une cellule au cours d'un evenement biologique (technique de FRET). Ces techniques (FRET, FRAP, FLIP...), ont revolutionne la facon de penser les processus biologiques (et tout ca, essentiellement grace a la caracterisation d'une proteine naturelle fluorescente extraite d'une meduse, la GFP).  [...]

[Biologie Cellulaire] Compter les passages

En résumé, même si tes cellules sont résistantes au G418, il est possible qu'elles n'expriment plus ta protéine suite à une mutation de sa séquence, ou du promoteur. Une autre hypothèse comme je l'ai dit précédement est que certains promoteurs sont sensibles aux métabolites secondaires produits durant la vie de la cellule, et qu'ils s'inhibent au fur et a mesure.  [...] Si tu as des anticorps dirigés contre ta protéine, tu peux faire une IF pour regarder le % de cellules exprimant ta protéine au cours des passages. Cela te permettra aussi de voir la localisation de ton récepteur qui peut éventuellement varier.  [...]

[Biochimie] Extraction protéique au laemmli ?

Afin de voir si elle était exprimé, j'ai regardé en immunofluorescence, et j'ai un signal pour cette protéine. Donc elle est bien exprimé dans mes cellules. Par contre, la localisation de la protéine change et se retrouve dans des structures nucléaires (genre aggrégats).  [...] Je me suis demandé si l'extraction au Ripa était la cause, et qu'il faudrait peut-être une extraction plus brute. Donc j'ai refait la manip et repris directement le culot de cellules dans du laemmli. Chauffé 5min à 90°C et centrifugé 1min.  [...]

[Biologie Cellulaire] Marquage par Ac-FITC : du solide ?

je ne pense pas que tu aies le choix. Quelle est la localisation cellulaire de ta protéine En immuno généralement on fixe les cellules puis on les perméabilise pour donner accès aux anticorps. Autre chose. ce type d'approche n'est que peu quantitatif.  [...] Nous travaillons actuellement par point counting. Les cellules sont fixées sur lames puis révélées. Le comptage de la protéine révélée dépend d'un opérateur à l'autre, et j'ai bien peur que la qualité de l'image enregistrée par le microscope ne soit pas de qualité optimale.  [...]

[Biologie Cellulaire] Protéine Iba-1: localisation intracellulaire ou membranaire chez la microglie?

Depuis un moment maintenant, je me pose la question de la localisation de cette protéine Iba1 (ionized calcium binding adaptor molecule 1) au niveau des cellules microgliales. Connu pour être l'un des marqueurs spécifiques de ces cellules et des macrophages, j'aimerai vraiment savoir dans quel compartiment elle se trouve.  [...] En dehors de la localisation de son gène, je n'ai pu trouver aucune information concernant la protéine. Je n'ai également rien trouvé sur des publications.  [...]

[Biologie Cellulaire] ultracentrifugation et cellules!

je voudrais réaliser des ultracentrifugations différentielles afin de déterminer la localisation d'une protéine spécifique qui m'intéresse. mais au lieu de le faire sur tissu, j'aimerais le faire à partir de culture de HEK. Auriez vous une idée du nombre de cellules dont j'ai besoin pour avoir au final une quantité de proteine suffisante pour faire des western.  [...] Tout dépend du compartiment cellulaire que tu veux isoler, de la représentation de ta protéine dans ce compartiment...Donc c'est par l'expérience que tu sauras quelle quantité de cellule te permet d'avoir une bande convenable en western. Pour commencer tu peux essayer plusieurs conditions où tu auras mis un nombre croissant de cellules.  [...]

Les gènes en mouvement observés dans le noyau des cellules

Les chercheurs sont en effet parvenus à fusionner une protéine TALE à la mCLOVER, une protéine fluorescente verte (ou GFP, qui valut le prix Nobel de chimie 2008 à ses découvreurs). La technique a permis d'observer la localisation de séquences d'ADN spécifiques au sein même du noyau de cellules vivantes.  [...] Toutes les cellules de l'organisme contiennent deux lots complets de chromosomes, avec un exemplaire provenant de chacun des parents. Nous avons marqué spécifiquement les chromosomes provenant du père ou de la mère, et avec la technologie TGV, nous avons suivi leur localisation au fil des différentes divisions cellulaires, explique Maria-Elena Torres-Padilla, directrice de recherche à l' Inserm et principale auteure de l'étude.  [...]

[Biologie végétale] ER-GFP ou pourquoi faire produire la gfp de le reticulum?

Je supposerai dans mon cas que c'est surtout pour éviter que la protéine se promène entre les cellules ce qui serait ennuyeux pour visualiser la localisation précise du gène qu'on veut rapporter.  [...] J'ai du mal a comprendre. tu veux dire que c'est une GFP spécialement modifiée pour rester dans le RE c'est ce que tu veux dire dans ce cas je ne vois pas comment elle peut permettre de suivre la localisation d'une autre protéine.  [...]

L'ezrine, pilier de l'architecture cellulaire | Dossier

Etant donné que la localisation de l'ezrine contrôle son activité, il est important d'étudier les différentes étapes de ce cheminement et leur durée pour mieux comprendre l'architecture cellulaire et le maintien des tissus épithéliaux.  [...] Pour suivre les mouvements de l'ezrine, les chercheurs de l'Institut Curie lui ont couplé un marqueur fluorescent puis ont combiné la microscopie à deux photons et la technique plus connue du FRAP. La protéine est alors pistée dans les cellules. sa localisation spatio-temporelle peut être déterminée avec précision (à 10 millisecondes et à 1 micron près).  [...]