• Santé - Protéine, Anticorps, Qualité

[Biochimie] Questions Western Blot

-de retenter le coup avec ta membrane uniquement si tes anticorps sont de bonne qualité / ta protéine se révèle facilement. Si c'est pour une hybridation plus délicate, tu risques d'avoir un résultat de mauvaise qualité.  [...] - si l'activation de la membrane la rends hydrophile et est utile pour le transfert. pourquoi faudrait-il la réactiver avant de repasser un anticorps dessus.  [...]

[Immunologie] Production proteine recombinante et anticorps

Sinon, les sociétés qui commercialisent des anticorps fournissent aussi des protéines recombinantes (ça sert de contrôle en western blot par exemple). Je te garantis pas la qualité. j'ai déjà acheté un anticorps qui ne reconnaissait même pas la protéine recombinante fournie pas la même société.  [...] j'irais poser la question a eurogentec ( http.//www.eurogentec.com/eu-home.html ) pour ce qui est d'un anticorps c'est plusieurs mois le temps que l'animal developpe sa réponse immunologique.  [...]

Western Blot et coomassie

en fait on colore au bleu de coomassie toutes les protéines du gel. Si c'est une protéine purifiée, ou une protéine produite in vitro, ça peut suffire puisqu'elle sera largement majoritaire. Sur un lysat cellulaire par exemple c'est plus difficile puisqu'il y a des milliers de protéines différentes mélangées, et dans ce cas un bleu de coomassie n'apporte pas grand chose (a part pour avoir un profil, une mesure globale de quantité, etc.).  [...] Le western blot utilise pour révéler la protéine des anticorps spécifiques. On a donc deux (meme trois) informations. la taille, la quantité et la qualité. si vous détectez votre protéine vous êtes sur que c'est bien elle, pas d'usurpation possible. C'est une information de spécificité.  [...]

[Biochimie] Immunoprécipitation pour éliminer une protéine ?

je souhaiterais réaliser une immuno-précipitation non pas pour isoler une protéine d'un lysat cellulaire mais pour l'éliminer totalement du lysat cellulaire. Je possède un anticorps spécifique de cette protéine. Quelqu'un sait-il si ce que j'envisage est possible, ou restera-t-il forcément de la protéine dans le lysat quoique je fasse.  [...] Il restera forcément un peu de protéine surtout si l'anticorps est de mauvaise qualité. Il faudra quantifier pour voir si ce qui reste peut gener ou non.  [...]

[Biochimie] Extraction d'une protéine nucléaire pour WB

Le probleme c'est que ma protéine est pas très exprimé et les anticorps ne sont pas de très bonne qualité (et les tampons d'extraction pas forcement les meilleurs), au final j'ai beaucoup de non spécifique, pas beaucoup de signal au niveau de ma bande.  [...] un conseil pour les grosses protéines comme la tienne, il est recommandé de faire un transfert sur la nuit (ca transfert tres mal).  [...]

[Biochimie] produire un anticorps

Je voudrais faire un anticoprs pour ma protéine favorite (celle sur laquelle je bosse, une kinase de plante) pour pouvoir faire des Western blot, des immunoprecipitations et eventuellement des immunolocalisations.  [...] tu ne peux vraiment pas tagger ta proteine c'est vraiment une technique plus sure, car tu n'es jamais certains de la qualité finale de ton anticorps.  [...]

Des anticorps "intelligents" à des fins diagnostiques

La qualité des anticorps dépend de leur spécificité pour les protéines. Leur capacité à détecter des protéines à l'intérieur des cellules représente également un avantage. Si, à ce jour, on sait fabriquer des anticorps, puis les humaniser, l'enjeu est maintenant de réduire leur délai d'identification qui s'élève actuellement à plusieurs mois et d'améliorer encore leur sélectivité pour qu'ils puissent reconnaître les moindres distinctions entre les protéines.  [...] En réunissant pour la première fois toutes ces propriétés - sensibilité à la forme des protéines, rapidité d'identification et expression dans la cellule vivante - dans un même anticorps, les chercheurs ont franchi une nouvelle étape dans ce qui pourrait constituer une approche diagnostique innovante.  [...]

[Biochimie] bruit de fond western blot

Pour certaines protéines, après révélation j'obtiens un bruit de fond énorme sur mes films. Les anticorps viennent de Santa cruz, ce n'est pas forcément tjs de la bonne qualité, mais ceux que j'utilise de santa cruz fonctionnent quand même très bien (p-ERK, ERK, Bactine, PKA...).  [...] en fait ça m'étonnerait pas que cet anticorps soit en carton. oui en fait j'ai tendance à vouloir plus laver pour ce genre de films pour éliminer au maximum les anticorps qui essayent de s'accrocher un peu partout mais du coup ça diminue également le signal sur mes bandes.  [...]

Le rapport Campbell ; Découverte majeure ou manipulation de données scientifiques ? - Page 4

Les besoins chiffrés en acides aminés essentiels se trouvent p.150. Ils permettent donc de vérifier la qualité des protéines de tout aliment vis-à-vis de la protéine de référence, en comparant les quantités d'acides aminés essentiels. Le plus petit rapport entre acide aminé de l'aliment et celui référence donnera l'indice chimique de l'aliment et est dit limitant si le rapport est en dessous de 1.  [...] A partie des ces calculs, il ressort que ttes les protéines animales sont d'excellente qualité (cela concerne uniquement la protéine bien sûr, pas l'aliment au complet.) et que de nombreuses protéines végétales le sont aussi. légumineuses, quinoa et oléagineux donc, mais également certaines plantes (amarante, ortie, sarrasin) et céréales (avoine, seigle).  [...]

[Biologie Cellulaire] Contrôler la pureté des protéines

Comparer un gel au bleu de Coomacie avec un western me parait être une bonne idée mais est-on sur que dans l'extrait protéique il n'y aura que la protéine que l'on veut étudier Si on utilise un anticorps contre notre protéine d'intérêt on ne verra qu'elle mais cela ne veux pas dire qu'il n'y a pas d'autres protéines que l'on ne voit pas.  [...] Finalement, sur la colonne d'affinité, je mettrais des anticorps anti-protéine testée ou encore, la protA quand on veut purifier la B et vice versa... Bien entendu, la protéine fixée sur la colonne serait achetée et non celle dont on teste la fonctionnalité.  [...]