• Santé - Promoteur, Insuline, Cellules, Beta

[Biologie Cellulaire] Sémiologie- rôle d'un transporteur

Le systeme Cre\Lox est genial pour cibler l'inactivation de genes dans un tissu specifique. Ici ton promoteur de l'insuline est un promoteur qui n'est actif que dans les cellules pancreatique. Tes souris transgeniques ne vont donc exprimer la Cre recombinase uniquement dans ces cellules.  [...] pour la précision. le promoteur insuline est pas réellement spécifique des cellules beta, mais c'est (pour un exercice) un détail.  [...]

[Génétique] manipulation génétique

Le code génétique est éffectivement universel. Le gène de l'insuline humaine, combiné avec un promoteur efficace, sera effectivement transcrit dans des cellules végétales pour produire des ARNm puis ces ARNm seront traduits par les ribosomes de la plante pour produire des protéines.  [...] Le problème, notemment dans le cas de l'insuline, c'est que le polypeptide obtenu à l'issu de la traduction n'est pas fonctionnel. Pour devenir fonctionnel, le polypeptide doit subir des modifications post-traductionnelle. C'est-à-dire dans le cas présent, il doit être coupé par des enzymes en certains cites spécifiques.  [...]

[Biologie Moléculaire] La molécule mystère - Page 11

Par contre je ne comprends pas trop pourquoi on analyse sa surexpression dans ce cancer puisque les inhibiteurs de Cdk sont des TSG (Tumor Suppressor gene), il devrait donc être réprimé au contraire. A moins que dans ce cancer les cellules surexpriment le mutant non fonctionnel, et pour peu qu'elle soient hétérozygote pour ce gène, cela permet de faire un dominant négatif.  [...] C'est bien le TGF beta qui par le biais de son récepteur le TGFR permet la stimulation de l'expression de p15INK4B principalement, et la répression du promoteur de Myc. D'autres part, le changement phénotypique qu'il peut occasionner est favorable dans l'acquisition de caractères invasifs dans des cellules cancéreuses.  [...]

[Génétique] But Cre/LoxP

Cela permet d'avoir un contrôle spatial (en choisissant un promoteur tissu-spécifique pour la Cre par exemple) ou temporel (en utilisant une Cre fusionnée a un domaine ligand-dépendant, permettant une activation seulement en présence d'un agoniste spécifique) et même spatio-temporel (tissu spécifique et inductible) de la recombinaison de la séquence loxP/loxP.  [...] C'est un promoteur d6 qui contrôle l'expression de la cre recombonase (neural spécifique). L'exon 3 de la beta cat est flanqué de sites lox. Dans les cellules neurales il y a excision de l'E3 donc j'imagine que ça crée un frameshift et donc un gène KO. Dans le reste de l'organisme, le gène est fonctionnel.  [...]

[Biologie Cellulaire] Fusion transcriptionnelle et traductionnelle

Cela permet par exemple de localiser ta protéine d'intérêt dans une cellule car elle sera liée à la GFP donc fluorescente.  [...] Plus le promoteur sera actif dans la cellule plus le gène rapporteur sera transcrit plus il y aura la protéine codée par le gène rapporteur. Pour une quantification on n'utilise pas la GFP mais quelque chose comme la bêta glucuronidase par exemple, j'ai oublié la réaction mais plus tu auras de bêta glucuronidase plus tu auras un précipité bleu que tu pourras doser, renseignant sur l'activité initiale du promoteur de ton gène d'intérêt. c'est la fusion transcriptionnelle.  [...]

[Biologie Cellulaire] probleme de transfection

Normalement je devais cotransfecter dans une lignée cellulaire un plasmide avec le promoteur qu'on étudie et qui contrôle l'Expression de la luciferase, et le plasmide controle codant pour la beta-Gal.  [...] Problème. une fois la transfection finit (seulement 5-10 minutes aprés), je m'aperçois que la personne qui a écrit les concentrations de plasmides a fait une erreur. Donc mon plasmide control est 10 fois moins concentré…du coup dans la panique (il me faut absolument réussir cette transfection) j'ai procédé a une autre transfection sur les mêmes cellules avec le plasmide contrôle pour essayer de complémenter (dans les 30 minutes après la première transfection)…je sais c'est stupide. Mais quand on panique….  [...]

[Biologie Moléculaire] Proteines recombinantes

On tire profit de l'opéron lactose oui. L'idée est d'introduire un transgène dans E.coli pour faire multiplier E.coli ensuite avec le gène d'intérêt et produire en grande quantité l'insuline. Il faut donc nécessairement un promoteur procaryote pour que E.coli puisse transcrire et traduire l'insuline et qu'on récupère l'insuline dans le milieu de culture.  [...] Dans un premier temps E.coli va croître dans un milieu sans lactose et en présence d'ampicilline. Cela permet d'éliminer les bactéries n'ayant pas intégré le plasmide recombinant (et donc le gène de résistance) et d'obtenir les bactéries d'intérêt, sans transcrire la beta-galactosidase et la chaine d'insuline.  [...]

[Biologie Moléculaire] Modification d'hépatocytes.

Donc mon idée était de créer un vecteur IRES contenant le gène de l'insuline, une gène protéase thiol (pour cliver la pré-insuline en insuline). Mon problème est que je ne sais pas quel promoteur choisir. En effet si je choisi un promoteur fort type CMV ou SV40 comment vais-je pouvoir contrôler la quantité d'insuline produite L'idéal serait de trouver un opéron ou un promoteur glucose dépendant mais je ne sais pas du tout si ça existe.  [...] J'imagine que le but est de fabriquer des pseudo cellules beta Il faut comprendre que la difficulté ce n'est pas de faire synthétiser l'insuline en présence de glucose, c'est de faire SECRETER l'insuline, et là c'est tout à fait autre chose. De plus, il faut également avoir une réponse insuline dans une gamme de glycémie physiologique ce qui est encore une difficulté en plus.  [...]

[Biologie Moléculaire] Promoteurs, gènes et plasmides

dc bien que jai une petite etape de selection dans des cellules bacteriennes (liee au fait que mon plasmide a une resistance AB), mon promoteur doit etre eucaryote.  [...] oui ton promoteur ne joue un rôle que kan il y a transcription. tu dois choisir un promoteur spécifique de tes cellules animales vu que c'est dans ces cellules là que tu veux que ton gène soit transcrit puis traduit.  [...]

Mammalian Expression Vectors

Donc, si t'as la possibilité, essaye peut-être un vecteur avec promoteur inductible, pour ne pas trop destabiliser tes cellules.  [...] Remarque dans le sens de la question de J Luc. Il me semble que la cycline E intervient dans la régulation du cycle cellulaire... Donc l'exprimer (en plus sous le contrôle d'un promoteur fort) est pour moi assez difficile, je pense que les cellules qui vont exprimer cette prot vont être complètement dérégulées, ou il y aura une modification de l'expression de ta prot exogène pour minimiser son effet néfaste et tu ne sélectionneras que des clones qui l'exprimeront peu ou pas du tout.  [...]