• Santé - Promoteur, Expression, Transgene

[Biologie Cellulaire] Comment, après transgenèse à l'aide d'un adénovirus, le gène épisomal, non réplicatif est répliqu...

Une partie de la réponse à cette question se trouve ci-dessus (expression enhancer/promoteur-spécifique). Donc pas de soucis pour l'opsine S. Mais effectivement, il y a co-expression des opsines L et M. Dans l'article, l'explication est que cette co-expression va induire une remodelage cellulaire conduisant à la formation d'un nouveau type de cône ( Co-expressing the L-opsin transgene within a subset of endogenous M-cones shifted their spectral sensitivity to respond to long wavelength light, thus producing two distinct cone types absorbing in the middle-to-long wavelengths, as required for trichromacy. ).  [...] A priori, le statut intégré ou épisomal du transgène n'influence pas son expression, ou alors faiblement. C'est surtout la nature du promoteur qui va déterminer le niveau d'expression (il existe des promoteurs forts, d'autres moins).  [...]

système Cre-ER(T2)

Tout n'est qu'une question de promoteur. En plus claire, le promoteur qui sera utilisé pour conduire l'expression de ta fusion Cre-ER peut etre constitutif, dans ce cas Cre-ER sera exprimé dans tous les tissus mais défloxera que si l'animal recoit l'agoniste de ER.  [...] ou bien le promoteur est tissu-spécifique et c'est là ou les choses se compliquent car en réalité il faut parler de promoteur tissu-sélectif et non plus de tissu-spécificité. En plus claire, un promoteur qui est censé entrainé l'expression du transgene dans le muscle squelettique uniquement (car c'est ce qu'il fait naturellement lorsqu'il est dans le genome à son locus), présentera des fuites transcriptionelles plus ou moins négligeable cad suivit ou non de la synthese de Cre-ER (ou de tout autre transgene).  [...]

Régénération cellulaire

Bonjours, ma question pourrais sembler étrange, mais la régénération cellulaire pourrait-elle exister dans un avenir proche Pas comme Walvorine, bien sur, mais je veux dire par exemple, une énorme coupure au bras, en deux heures elle est déja cicatrisée.   [...] Pour les autres méthodes, regardez du côté des intégrases virales. Pour ce qui est de l'expression, on associe au transgène un promoteur fort. Et si, c'est efficace. Il est vrai cependant qu'on ne contrôle pas le site d'intégration.  [...]

Souris transgéniques - nomenclature

abc-Cre signifie qu'il y a un transgène permettant l'expression de la recombinase Cre sous le contrôle du promoteur abc (voir système cre-lox également).  [...] Dans le cas des rapportrices, un transgène ubiquitaire (souvent avec le locus Rosa26 dont le promoteur est ubiquitaire) dispose d'un gène rapporteur (YFP, tomato, bgal) avec un stop floxé.  [...]

Expression d'un transgène

Si on veut exprimer un transgène uniquement dans un type cellulaire d'un organisme il faut le mettre sous le contrôle du promoteur d'un gène exprimé uniquement dans ce type cellulaire.  [...] Mais est-ce que le fait de mettre ce promoteur fort ne va pas déclencher l'expression du transgène dans d'autres tissus, c'est-à-dire là où je ne veux pas qu'il soit exprimé.  [...]

GFP et mcherry

1) Si je comprends bien on utilise les gènes qui codent pour la GFP et la mcherry, qui seront insérés (liés au promoteur) dans un transgène, quand ceux ci seront traduits en protéines il y aura fluorescence et donc on pourra détecter si il y a eu expression de notre gène d'intérêt.. Ai je bien compris.  [...] Pas vraiment.. il s'agit juste de révéler l'expression d'un gène... Pour cela on introduit par agroinfiltration plusieurs types de plasmides soit avec le gène d'intérêt sur exprimé ou pas, à ce gène est couplé la GFP et la mcherry (d'ailleurs je ne sais même pas où l'on place la mcherry) c'est pour ça que je ne vois pas son intérêt.  [...]

[Biologie Moléculaire] Eteindre expression d'un gène dans un organe/tissus bien précis

Est ce que quelqu'un sait comment on peut faire pour éteindre l'expression d'un gène dans un organe bien précis. Car on a un exercice ou on fait la transformation par agrobacterium d'un gene. Ce gène a un impact positif sur le méristeme floral de la plante mais a un impact négatif sur le systeme racinaire.  [...] Je tiens à préciser que je n'ai pas de connaissances spécifiques en plantes, mais je pense à cette option. un transgène dont le promoteur est spécifique du système racinaire et dont le transcrit est complémentaire à l'ARNm de ton gène cible. Avec le mécanisme d'interférence à l'ARN, tu éteins l'expression de ton gène d'intérêt dans les cellules voulues.  [...]

[Biologie Cellulaire] Compter les passages

En ce qui concerne la perte des protéines, s'il s'agit de transfectants stables, il est possible que l'expression du transgene diminue dans le temps, soit parce que les métabolites secondaires produits par la cellule inhibent le promoteur, soit parce que les cellules inactive le transgène.  [...] Il est possible que malgré la présence du gène de resistance, et la sélection, tu perdes l'expression de ta protéine, si celle ci est +/- toxique pour la cellule. Seront alors selectionné (au sens Darwinien) les cellules exprimant peu ou plus cette protéine.  [...]

[Biologie Moléculaire] Projet de clonage

ce trimestre on fait un projet de clonage du gen-gfp dans pcDNA3.1 et calculer l expression du transgene le gfp gen doit etre apres le CMV promoteur. on doit faire une strategie de clonage ( on est a 7 en groupe) chaqu un doit pense a une strategie et apres on va comparer les resultats.  [...] comme controle de lexpression in vitro (dans 3T3 cellules) il faut construire le suivant. clonez le gfp gen dans le plasmide pcDNA3.1 apres le CMV promoteur. c est un promoteur virale qui est actif dans toutes les cellules eukaryotes. controlez avec les enzymes de restrictions le nouveau plasmide. pcDNA3.1-GFP.  [...]

[Génétique] Systeme GAL4/UAS

Ce système a été beaucoup utilisé en enhancer trap (piège à enhancer). Cela veut dire qu'entre les pieds de p, on met gal4 derrière un promoteur faible (promoteur minimal), ensuite suivant l'endroit où s'insert le transgène, il suit l'expression du gène près duquel il est inséré.  [...] Une autre approche est la suivante. si tu t'intéresses à une gène particulier, que tu aurais identifié par lecture de la séquence par exemple, tu peux isoler ses séquences régulatrices, même grossièrement, et les placer devant gal4, dans ton transgène. Une fois inséré, l'expression du transgène devrait suivre celle de ton gène d'intérêt, avec souvent des variations d'intensité suivant la localisation du transgène dans le génome (effet de position).  [...]